1.一种细胞凋亡检测试剂盒,其特征在于,包括以下体积原料:2-3μL膜联蛋白V、0.5-1.5mL结合液、0.5-1.5mL封闭液、2-3μL活性染料Ⅰ、4-6μL活性染料Ⅱ,所述结合液由质量体积比g/mL为(0.6-1.0):(0.05-0.1):(0.8-1.2):(96-98)的甾体皂甙、钙离子溶液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、水组成;所述活性染料Ⅰ为异硫氰酸荧光素,所述活性染料Ⅱ为碘化丙啶或7-氨基放线菌素D;所述活性染料Ⅰ浓度为3μg/mL-5μg/mL,所述活性染料Ⅱ浓度为1μg/mL-3μg/mL;所述结合液中的钙离子溶液选自氯化钙溶液、氢氧化钠钙溶液、葡萄糖酸钙溶液、柠檬酸钙溶液、硫酸钙溶液其中的一种;所述结合液pH为7.0-8.0;所述封闭液由质量体积比g/mL为(0.6-0.8):(6-8):(6-10)的鱼精蛋白、氯化钠溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液组成。
2.如权利要求1所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、细胞样品收集与洗涤:取1×106-3×106个细胞置入试管中,用1.0-1.5mL温度为2-8℃的磷酸盐缓冲液洗涤两次,离心分离,弃去上清液,得到细胞样品沉淀;
S2、细胞准备:向所述细胞样品沉淀中加入0.5-1.5mL温度为2-8℃的结合液重悬,得到细胞悬浮液,并调整细胞数为1×106-3×106个/ml,备用;
S3、膜联蛋白V标记:将2-3μL膜联蛋白V与2-3μL活性染料Ⅰ混合,轻柔涡旋混匀,避光孵育,形成膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素标记复合物;
S4、细胞染色与结合:取100μL细胞悬浮液并向细胞悬浮液中加入4-6μL膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素标记复合物,轻柔涡旋混匀,避光孵育;
S5、封闭与染色:向S4孵育后的细胞悬浮液中加入0.5-1.5mL封闭液,并加入4-6μL活性染料Ⅱ染色,轻柔涡旋混匀,避光孵育,得到双色标记细胞样品;
S6、流式细胞仪参数设置及检测:采用流式细胞仪对双色标记细胞样品进行检测,设置流式细胞仪的通道、激发波长,收集待测试样的绿色和红色荧光信号。
3.如权利要求2所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,所述S1中离心分离转速为800-1200r/min,离心分离时间为5-10min。
4.如权利要求2所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,所述S3、S4、S5中孵育时间为4-6min、孵育温度为20-25℃,所述S3、S4、S5中涡旋转速为600-800r/min、涡旋时间为5-10s。
5.如权利要求2所述的一种细胞凋亡检测试剂盒的检测方法,其特征在于,所述S6中设置流式细胞仪的通道为绿色荧光通道及红色荧光通道,绿色荧光通道激发波长为488nm,收集波长为500-550nm的绿色荧光信号,红色荧光通道激发波长为530-550nm,收集波长为600-670nm的红色荧光信号。