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专利号: 2022116309077
申请人: 西南交通大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 医学或兽医学;卫生学
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于白蛋白的CRISPR/Cas9靶向递送系统的制备方法,其特征在于,步骤如下:S1、构建CRISPR‑Cas9质粒:

构建CRISPR的敲除质粒pCas9‑PAR2,采用鼠源PAR2的CRISPR质粒,鼠源F2RL1sgRNA序列如SEQ ID No:2所示;

S2、将人血清白蛋白溶于纯水中,调节pH为8;将人血清白蛋白溶液、聚乙烯亚胺溶液、pCas9/PAR2混合,控制聚乙烯亚胺的氮与质粒的磷酸盐的氮磷比为16:1,涡旋数十秒,静置数十分钟;

S3、在搅拌条件下,向步骤S2得到的混合溶液中加入乙醇溶液,继续搅拌30分钟,再加入戊二醛水溶液,搅拌30分钟;

S4、向步骤S3得到的溶液中加入炎症靶向肽CBP,4℃搅拌过夜,使得CBP与白蛋白纳米粒充分的偶联;最后采用超滤管超滤纳米粒溶液,除去未结合的白蛋白、戊二醛、乙醇残留,得到TAP/pCas9‑PAR2。

2.如权利要求1所述的基于白蛋白的CRISPR/Cas9靶向递送系统的制备方法,其特征在于,步骤S1中,构建eSpCas9‑2A‑Puro(PX459)V2.0质粒作为CRISPR的敲除质粒pCas9‑PAR2。

3.如权利要求1所述的基于白蛋白的CRISPR/Cas9靶向递送系统的制备方法,其特征在于,所述质粒自带氨苄抗性的基因‑AmpR、连接原核生物基因质粒的起始位点‑Ori、启动子‑U6、敲除PAR2的基因‑F2RL1、Cas9核酸酶和表达嘌呤霉素抗性蛋白的PuroR。

4.如权利要求1所述的基于白蛋白的CRISPR/Cas9靶向递送系统的制备方法,其特征在于,步骤S2中,人血清白蛋白溶液中,人血清白蛋白浓度为10mg/mL。

5.如权利要求4所述的基于白蛋白的CRISPR/Cas9靶向递送系统的制备方法,其特征在于,步骤S2中,聚乙烯亚胺溶液中,聚乙烯亚胺为分子量10k。

6.如权利要求1所述的基于白蛋白的CRISPR/Cas9靶向递送系统的制备方法,其特征在于,步骤S3中,乙醇溶液是体积浓度96%的乙醇溶液。

7.如权利要求1所述的基于白蛋白的CRISPR/Cas9靶向递送系统的制备方法,其特征在于,步骤S4中,使用膜孔大小为30kDa的超滤管超滤纳米粒溶液。