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专利号: 2022113336570
申请人: 曲阜师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种保持稳定性状的小鼠骨髓树突状细胞的原代培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将离断得到的小鼠的股骨和胫骨,冲洗骨髓干细胞,利用注射器吸取1 mLRPMI-1640培养基从骨骺端刺入骨髓腔中并从另一端刺出,脉冲式推动注射器,反复冲洗骨髓腔,直至股骨、胫骨变白,得到冲洗下来的骨髓细胞;

(2)将所得骨髓细胞离心,弃上清,将沉淀中加入红细胞裂解液,混匀后冰上静置,加入PBS后离心后弃上清;

(3)将离心所得的细胞悬于RPMI-1640基础培养基中,悬液过200目细胞筛收集起置于离心管中,离心后弃上清;

(4)将离心所得细胞重悬于完全培养基混匀,接种于6孔板中,置于培养箱中采用梯度式CO所述梯度式CO

(5)培养结束后,弃去上清液以及悬浮细胞,加入等量的完全培养基;

(6)第4、6天半量更换完全培养基;

(7)第7-8天,收获BMDC。

2. 根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,步骤(2)中,所述红细胞裂解液包含8.1 g/L的氯化铵,2.5 g/L的KHCO3和0.37g/L的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚,pH 7.2-7.4;每1mL沉淀中加入5-8mL红细胞裂解液。

3. 根据权利要求1或2所述的原代培养方法,其特征在于,步骤(2)中,所述完全培养基的组成为:含有10%胎牛血清,15 ng/mL GM-CSF,10 ng/mL IL-4,1%青霉素-链霉素,1%丝素蛋白的RPMI-1640培养基。

4. 根据权利要求1所述的原代培养方法,其特征在于,步骤(2)和(3)中,所述离心的条件均为4℃,1500 rpm,3-5 min。