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专利号: 2022112808697
申请人: 常州国药医学检验实验室有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2026-01-27
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种评估早期胃癌淋巴结转移风险的组合物,其特征在于,所述组合物包括:a.用于检测CLGN基因启动子区域的甲基化程度的制剂a;

b.用于检测ZNF354C基因启动子区域的甲基化程度的制剂b;

c.用于检测LMO3基因启动子区域的甲基化程度的制剂c;

d.用于检测LDHB基因启动子区域的甲基化程度的制剂d;

e.用于检测ALDH1L1基因启动子区域的甲基化程度的制剂e;

f.用于检测PTPN13基因启动子区域的甲基化程度的制剂f;

g.用于检测PPP2R2B基因启动子区域的甲基化程度的制剂g;

h.用于检测EYA4基因启动子区域的甲基化程度的制剂h;所述制剂a包括引物对a,所述引物对a包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.1 和SEQ ID No.2 所示;

所述制剂b包括引物对b,所述引物对b包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.3 和SEQ ID No.4 所示;

所述制剂c包括引物对c,所述引物对c包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6 所示;

所述制剂d包括引物对d,所述引物对d包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8 所示;

所述制剂e包括引物对e,所述引物对e包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示;

所述制剂f包括引物对f,所述引物对f包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12 所示;

所述制剂g包括引物对g,所述引物对g包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.13和SEQ ID No.14 所示;

所述制剂h包括引物对h,所述引物对h包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.15和SEQ ID No.16 所示。

2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物还包括用于检测内参基因COL2A启动子区域的甲基化程度的制剂i;所述制剂i包括引物对i,所述引物对i包括正向引物和反向引物,所述正向引物和反向引物分别如SEQ ID No.17和SEQ ID No.18 所示。

3.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物还包括以下组分中的任一种或多种:PCR 反应液、酶混合液、阳性对照、阴性对照;所述PCR反应液包括缓冲液、MgCl2、dUTP 和dNTPs;所述酶混合液包括Taq 酶和UNG 酶。

4.根据权利要求3所述的组合物,其特征在于,所述阳性对照为:含有CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4甲基化基因部分序列的假病毒、含有人COL2A基因部分序列的假病毒。

5.权利要求1 4任一项所述的组合物在制备评估早期胃癌淋巴结转移风险产品中的用~途。

6.根据权利要求5所述的用途,其特征在于,所述评估早期胃癌淋巴结转移风险包括以下步骤:S1.从样本中提取DNA并进行转化,得到高纯度bis‑DNA;

S2.配制样本反应液、阳性对照反应液、阴性对照反应液;

S3.对步骤S2中的各样品进行PCR扩增反应,获取扩增循环数;

S4.基于逻辑回归方程得到被检测胃癌组织样本的甲基化指数。

7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述逻辑回归方程为:H‑Index=4.41+A1*X1+A2 *X2+A3*X3+A4*X4+A5*X5+A6*X6+A7*X7+A8*X8;

其中,H‑Index代表甲基化指数;

A1 A8分别为基因CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4的临床系~数;X1 X8分别为基因CLGN、ZNF354C、LMO3、LDHB、ALDH1L1、PTPN13、PPP2R2B、EYA4与内参基~因的CT差值。