1.一种诱导酵母进入VBNC状态的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)利用H2O2和/或高酸对酵母进行预处理,
(2)将经过步骤(1)预处理后的酵母制成悬浮液并进行声热联合处理使其进入VBNC状态。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述利用H2O2对酵母进行预处理,是将菌悬
6 8
液与30%H2O2混合以使H2O2的终浓度为0.5‑30mM、酵母浓度为10~10 CFU/mL,处理时间为
1‑30min。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述利用高酸对酵母进行预处理,是将生
6 8
理盐水的pH调整为3.0‑4.5,然后将酵母菌体重悬于其中,得到浓度为10~10 CFU/mL的酵母菌悬液,预处理1‑60min。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述pH=3.0‑4.5的生理盐水由柠檬酸、醋酸或盐酸对生理盐水进行pH调节后制得。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述利用H2O2和高酸对酵母进行预处理,是
6 8
指将酵母菌体重悬于pH=3.0‑4.5的生理盐水溶液中,使得菌体浓度达到10~10 CFU/mL,随后加入30%H2O2溶液、混合,使得H2O2的终浓度达到0.5‑30mM保持1‑30min。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)将所述将经过步骤(1)预处理后的酵母制成悬浮液,是将经步骤(1)预处理后的酵母菌悬液进行离心处理并收集菌体,将菌体重悬于等体积生理盐水中得到悬浮液。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述声热联合处理条件为:将酵母的菌悬液在50‑60℃条件下用50‑180W的超声波处理3‑30min。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述声热联合处理条件为:将酵母的菌悬液在50℃条件下用100W的超声波处理15‑25min。此时可以使处于VBNC状态的酵母占比达到100%。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)的预处理与步骤(2)的声热联合处理的总时间为5‑90min。
10.检测VBNC状态酵母菌的方法,其特征在于,对应用权利要求1~9任一所述方法诱导处理后的酵母悬液进行美兰染色,使用血球计数板对活菌进行计数,记酵母悬浮液中活菌浓度为A1;对处理后的酵母悬浮液进行梯度稀释,采用平板计数法对可培养菌进行计数,记酵母悬浮液中可培养菌浓度为A2,计算得悬浮液中VBNC状态酵母浓度为A1‑A2,则VBNC状态酵母菌比例为(A1‑A2)/A1*100%。