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专利号: 2022102581189
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-12-31
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种重组质粒,其特征在于,含有第一启动子、第二启动子、色氨酸合成酶基因簇trpEDCBA、操纵区trpO和D,D‑羧肽酶基因dacA;所述操纵区trpO具有可与由阻遏蛋白trpR和色氨酸形成的共价二聚体结合的结合位点;所述第一启动子调控trpEDCBA的表达;所述第二启动子调控操纵区trpO的基因表达;所述操纵区trpO的下游连接D,D‑羧肽酶基因dacA;所述第一启动子和第二启动的转录方向相反。

2.一种色氨酸操纵子系统,其特征在于,包括敲除了色氨酸合成酶基因簇trpEDCBA的大肠杆菌细胞和权利要求1所述的重组质粒。

3.色氨酸操纵子和温敏阻遏系统共表达的重组质粒,其特征在于,含有SPP型启动子、低温诱导型启动子PR、高温诱导型启动子PL、色氨酸合成酶基因簇trpEDCBA、操纵区trpO、D,tsD‑羧肽酶基因dacA和温敏阻遏蛋白CI 857;所述操纵区trpO具有可与由阻遏蛋白trpR和色ts氨酸形成的共价二聚体结合的结合位点;所述启动子PL上具有温敏阻遏蛋白CI 857的结合ts位点;所述启动子PL调控trpEDCBA的表达;所述启动子PR调控温敏阻遏蛋白CI 857的表达;

所述SPP型启动子调控操纵区trpO的基因表达;所述操纵区trpO的下游具有dacA基因;所述启动子PL和启动子PR的转录方向相反。

4.根据权利要求3所述的重组质粒,其特征在于,所述dacA基因的上游还含有trpL碱基序列;所述trpL碱基序列如SEQ ID NO.2所示。

5.含有权利要求3或4所述重组质粒的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌的基因组敲除了色氨酸合成酶基因簇trpEDCBA。

6.根据权利要求5所述的重组大肠杆菌,其特征在于,所述大肠杆菌选自:E.coli BL21、E.coliJM109、E.coli DH5α、E.coli Rosetta、E.coli TOP10、E.coliM110、E.coli S110中的任一种。

7.权利要求5或6所述的重组大肠杆菌在生产目的蛋白中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述目的蛋白包括但不限于淀粉酶、绿色荧光蛋、胶原蛋白、果糖基转移酶、甲基对硫磷水解酶、过氧化氢酶或葡萄糖氧化酶。

9.一种调控大肠杆菌重组蛋白分泌的方法,其特征在于,将权利要求5或6所述的大肠杆菌在如下条件下发酵:前12h于37℃~42℃培养;12h后于28~32℃。

10.权利要求1~4任一所述的重组质粒,或权利要求5或6所述的重组大肠杆菌,或权利要求9所述的方法在食品或生物领域的应用。