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专利号: 202210169055X
申请人: 皖南医学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 有机高分子化合物;其制备或化学加工;以其为基料的组合物
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.毛霉胞外多糖的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括以下步骤:

1)毛霉培养:毛霉(Mucor sp.)接种于PDA平板固体培养基活化后,用接种针挑取边缘菌落接入液体培养基中,培养,在26℃~30℃、100~180r/min恒温振荡箱中培养5~9d;获得毛霉发酵液;

2)毛霉胞外粗多糖的提取:步骤1)培养后获得的5L毛霉发酵液经布氏漏斗抽滤除去菌丝体,用旋转蒸发仪将滤液浓缩至原体积的1/10,加入4倍体积的95%乙醇,多糖不溶于乙醇以白色絮状沉淀析出,静置过夜后倾去上清液取底部沉淀,5000~15000r/min离心10~

20min,弃上清,沉淀加水复溶,5000~15000r/min离心10~20min,收集上清,将上清液浓缩至300mL,再加入0.1g木瓜蛋白酶,于37~60℃水浴锅中酶解反应1~6h,再加入酶解反应后溶液1/3体积的Sevag液,通过10~15次的混合、振荡、离心直至离液面交界处无白色混悬,收集上层水相溶液,通过旋转蒸发除去残留的试剂;随后用D301型大孔树脂对溶液进行脱色,收集洗脱液,旋蒸至100mL,0.22μm滤膜过滤除菌,使用再生纤维素透析袋,截留分子量

1000~10000Da,于4℃冰箱透析24~72h,收集截留液经冷冻干燥得到毛霉胞外粗多糖;

3)胞外多糖分离纯化:包括离子交换柱层析和凝胶柱层析;

所述离子交换柱层析具体为:

将步骤2)制备的毛霉胞外粗多糖配置为水溶液,用0.45μm一次性针头过滤器除杂,将样品缓慢加入到DEAE‑52阴离子交换柱,流动相为水和NaCl溶液,在恒流泵加压下依次用水和NaCl溶液梯度洗脱,采用自动部分收集器收集0.2mol/L NaCl洗脱液,浓缩并透析脱盐后冻干:所述凝胶柱层析具体为:

将称离子交换柱层析纯化后的样品配制成样品溶液,用0.22μm滤器除杂后,将样品缓慢加入到Sephadex G‑100凝胶柱,流动相为水,收集洗脱液,用蒽酮硫酸法检测各管糖含量并绘制洗脱曲线,收集主峰部分,浓缩透析冻干得毛霉胞外多糖。

2.一种权利要求1所述制备方法制备的毛霉胞外多糖。

3.根据权利要求2所述的毛霉胞外多糖,其特征在于,所述毛霉胞外多糖重均分子量为4

7.78×10 Da,主要由甘露糖、半乳糖、岩藻糖、阿拉伯糖和葡萄糖组成,摩尔比为0.466:

0.169:0.139:0.126:0.015。

4.一种权利要求2或3所述的毛霉胞外多糖的应用,其特征在于,所述的毛霉胞外多糖用于制备治疗肿瘤的药物。

5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的毛霉胞外多糖用于制备抑制胃癌细胞增殖的药物。