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专利号: 2022101291812
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种能够利用芦丁生产槲皮素的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌表达嗜热链球菌来源的L‑鼠李糖苷酶和耐热β‑葡萄糖苷酶;所述L‑鼠李糖苷酶DthRha具有如Genbank登录号WP_012548615.1所示的氨基酸序列;所述β‑葡萄糖苷酶Dth3具有如Genbank登录号ACI19278.1所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌,其特征在于,编码所述DthRha的基因序列如SEQ ID NO.1所示,编码所述Dth3的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1或2所述的重组大肠杆菌,其特征在于,以pET系列载体表达所述L‑鼠李糖苷酶和耐热β‑葡萄糖苷酶。

4.根据权利要求1~3任一所述的重组大肠杆菌,其特征在于,以E.coli BL21(DE3)为宿主。

5.含权利要求1~4任一所述重组大肠杆菌的细胞催化剂,其特征在于,所述细胞催化剂包括但不限于所述重组大肠杆菌的细胞、细胞培养液或固定化细胞。

6.权利要求1~4任一所述重组大肠杆菌的高密度发酵方法,其特征在于,将所述重组大肠杆菌接种至发酵培养基中,于35~37℃发酵,发酵过程溶氧控制为40%,pH为7.0;并于发酵12h后降温至30℃开始补料,补料流速为20mL/h;

所述发酵培养基包括但不限于TB培养基或高密度发酵培养基;所述高密度发酵培养基含有KH2PO4 6g/L、K2HPO4·3H2O 16.4g/L、(NH4)2SO4 5g/L、无水柠檬酸1g/L、MgSO4·7H2O 

1g/L、酵母粉10g/L、甘油10‑30g/L、麦芽糖糊精10g/L、维生素B1 0.1g/L和微量元素溶液

1mL/L;所述微量元素溶液含有:柠檬酸铁100g/L,ZnCl3 18g/L,MnSO4·H2O 14.64g/L,CuSO4·5H2O 0.75g/L,Na2MoO4·2H2O 2g/L,CaCl2.2H2O 2g/L,H3BO3 3.0g/L,CoCl2·6H2O 

2.5g/L,NiSO4·6H2O 2.5g/L和HCl 100mL。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,补料的成分包括:3g/L MgSO4·7H2O、10g/L酵母粉和500g/L甘油。

8.一种生产槲皮素的方法,其特征在于,以芦丁为底物,以权利要求1~4任一所述的重组大肠杆菌为细胞催化剂生产槲皮素。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,将所述重组大肠杆菌细胞加入至含终浓度

10~40g/L芦丁的反应体系中,于75~85℃反应至少4h。

10.权利要求1~4所述重组大肠杆菌,或权利要求5所述的细胞催化剂,或权利要求6~

9任一所述方法在生产含槲皮素的食品、药品或保健品中的应用。