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专利号: 2021116614357
申请人: 广西医科大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种大鼠肝癌模型细胞的体外培养方法,其特征在于,包括以下步骤:获得大鼠肝癌细胞系RH‑35细胞;

制备明胶/聚乳酸/透明质酸的混合液,所述混合液是以20~100mg/mL的明胶溶液、2~

15mg/mL透明质酸溶液和10~50mg/mL聚乳酸溶液按照1:(1~4):1的比例混合而成;

三维培养,将所述RH‑35细胞接种至明胶/聚乳酸/透明质酸组成三维介质和3D培养混合液中培养7~15天,即得。

2.根据权利要求1所述的体外培养方法,其特征在于,所述三维培养方法具体包括:第一培养,将所述RH‑35细胞接种至未成凝胶的明胶/聚乳酸/透明质酸混合液和3D培养混合液的培养体系中,浸润后观察细胞在培养皿中生长至70%~80%;及第二培养,收获所述第一培养中得到的细胞,清洗,消化,浓缩后,转移至铺设有明胶/聚乳酸/透明质酸成型的三维培养水凝胶支架和3D培养混合液的环境中培养,培养7~15天,即得。

3.根据权利要求2所述的体外培养方法,其特征在于,所述3D培养混合液为包含全氟辛酸或全氟辛烷磺酸钾的高糖DMEM培养液。

4.根据权利要求3所述的体外培养方法,其特征在于,所述3D培养混合液包含0.3~

10mg/L全氟辛酸或0.3~10mg/L全氟辛烷磺酸钾。

5.根据权利要求3所述的体外培养方法,其特征在于,所述高糖DMEM培养液包含

116.6mg/L无水氯化钙、59.05mg/L L‑亮氨酸亚油酸、0.042mg/L亚油酸、0.0013mg/L五水硫酸铜、91.25mg/L L‑赖氨酸盐酸盐、0.105mg/L硫辛酸、0.05mg/L九水硝酸铁、17.24mg/L L‑蛋氨酸、8.1mg/L酚红、0.417mg/L七水硫酸亚铁、35.48mg/L L‑苯丙氨酸、0.081mg/L 1,4‑丁二胺二盐酸盐、311.8mg/L氯化钾、26.25mg/L L‑丝氨酸、55mg/L丙酮酸钠、28.64mg/L氯化镁、53.45mg/L L‑苏氨酸、0.0035mg/L维生素H、48.84mg/L无水硫酸镁、4.45mg/L L‑丙氨酸、2.24mg/LD‑泛酸钙、6999.5mg/L氯化钠、7.5mg/L L‑天门冬酰胺、氯化胆碱8.98mg/L、

54.35mg/L无水磷酸二氢钠、6.65mg/L L‑天门冬氨酸、2.65mg/L叶酸、71.02mg/L磷酸氢二钠、17.56mg/L L‑半胱氨酸盐酸盐、12.6mg/Li‑肌醇、0.432mg/L七水硫酸锌、7.35mg/L L‑谷氨酸、2.02mg/L烟酰胺、147.5mg/L L‑精氨酸盐酸盐、17.25mg/L L‑脯氨酸、2mg/L盐酸吡哆醛、31.29mg/L L‑胱氨酸盐酸盐、9.02mg/L L‑色氨酸、0.031mg/L盐酸吡哆醇、365mg/L L‑谷氨酰胺、38.4mg/L L‑酪氨酸、0.219mg/L核黄素、18.75mg/L甘氨酸、52.85mg/L L‑缬氨酸、2.17mg/L盐酸硫胺、31.48mg/L L‑组氨酸盐酸盐、3151mg/L D‑葡萄糖、0.365mg/L胸苷、

54.47mg/L L‑异亮氨酸、2mg/L次黄嘌呤和0.68mg/L维生素B12。

6.权利要求1~5任一项所述的体外培养方法得到肝癌模型细胞,所述细胞按照WB表达检测计,以β‑actin为参照,HAb18G/CD147的相对表达量为3.6~6.07,paxillin的相对表达量为4.39~6.97,FAK的相对表达量为1.85~3.17。

7.用于建立肝癌模型的的细胞制剂,所述细胞制剂为细胞冻存管、冻存液或冻干粉,所述细胞制剂包含权利要求6所述的肝癌模型细胞。

8.一种建立肝癌动物模型的方法,其特征在于,将权利要求6所述的肝癌模型细胞或权利要求7所述的细胞制剂注射待建立模型的动物,观察动物体内肿瘤体积的变化情况。

9.权利要求1~5任一项所述的体外培养方法得到的肝癌模型细胞在建立肝癌动物模型中的应用。