1.一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述方法包括:将球孢白僵菌Beauveria bassiana接种于PDA斜面进行斜面培养,获得PDA斜面孢子;
用无菌水将所述PDA斜面孢子洗下制得孢子悬浮液,后将所述孢子悬液接种至种子培养基中进行种子培养,获得发酵种子液;
将所述发酵种子液接种到固态发酵培养基中进行固态培养,所述固态培养中,监测所述固态发酵培养基中前体物PPA的含量,通过将前体物PPA添加到所述固态发酵培养基中以控制所述前体物PPA在所述固态发酵培养基中的浓度在10‑40g/kg范围内。
2.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述前体物PPA添加时,将所述前体物PPA制备成pH为7‑12、浓度为45‑55%(m/V)的PPA溶液进行添加。
3.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述前体物PPA添加次数为1‑6次。
4.根据权利要求3所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,每次所述前体物PPA的添加量为10‑20g/kg固态发酵培养基。
5.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述监测所述固态发酵培养基中前体物PPA的含量,通过将前体物PPA添加到所述固态发酵培养基中以控制所述前体物PPA在所述固态发酵培养基中的浓度在10‑40g/kg范围内,具体包括:
每天从所述固体发酵培养基中进行取样,由高效液相色谱检测所述前体物PPA浓度;
当所述前体物PPA浓度低于10‑40g/kg固态发酵培养基时开始补加PPA以控制所述前体物PPA浓度在10‑40g/kg固态发酵培养基;
最终所述PPA添加总量为50‑80g/kg固态发酵培养基时停止补料。
6.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法,其特征在于,所述斜面培养的条件为:温度为27‑29℃,时间为3‑7d。
7.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法剂,其特征在于,所述用无菌水将所述PDA斜面孢子洗下制得孢子悬浮液,后将所述孢子悬液接种至种子培养基中进行种子培养,获得发酵种子液,具体包括:
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用无菌水将PDA斜面孢子洗下制得孢子量为10‑10个/ml的孢子悬浮液,将所述孢子悬液按质量分数为1‑3%接种至种子培养基中进行种子培养,所述种子培养的条件为:温度为
25‑30℃、转速为200‑300r/min,时间为36‑48h,获得发酵种子液。
8.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法剂,其特征在于,所述发酵种子液按质量分数为5‑10%接种到固态发酵培养基中,所述固态培养的条件为:温度为25‑30℃,时间为5‑21d。
9.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法剂,其特征在于,所述种子培养基的配方为:葡萄糖20g/L,酵母粉10g/L,七水合硫酸镁2g/L,二水合氯化钙1g/L,磷酸氢二钾1.8g/L,磷酸二氢钾0.75g/L,微量元素溶液50ml/L。所述微量元素溶液的组成及含量为:EDTA‑2Na 2000mg/L,七水合硫酸亚铁600mg/L,七水合硫酸锌200mg/L,一水合硫酸锰150mg/L,硼酸30mg/L,六水合氯化钴20mg/L,二水合氯化铜40mg/L,二水合氯化镍40mg/L,二水合钼酸钠5mg/L,配置好后121℃灭菌20min。
10.根据权利要求1所述的一种R‑(+)‑2‑(4‑羟基苯氧基)丙酸的生物合成方法剂,其特征在于,所述固态发酵培养基的配方为:干料200‑400g/kg,其中,所述干料包括麸皮、稻壳、米糠、玉米糁和大米中的至少一种;微量元素溶液25‑50ml/kg,加水使料水比1:(1.5‑2.5),加入PPA溶液6‑32ml,其中所述PPA溶液的浓度为500g/L,用NaOH将溶液pH调整为7;混合好后121℃灭菌20min。