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专利号: 2021107797363
申请人: 博以新(杭州)生物技术有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2026-04-06
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述方法包括,抗体1与β‑环糊精包合的吖啶酯类似物连接,得到发光包合物连接的抗体1;抗体2连接辣根过氧化物酶,得到酶连接的抗体2;将发光包合物连接的抗体1、酶连接的抗体2、待测样本以及本底抑制剂混合并孵育后,加入激发液,检测发光信号值。2.根据权利要求1所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述方法具体包括以下步骤:(1)β‑环糊精包合吖啶酯类似物得到发光包合物;(2)抗体1连接发光包合物,得抗体1‑β‑CDA;(3)抗体2连接辣根过氧化物酶,得抗体2‑HRP;(4)检测:将检测样本、本底抑制剂、抗体1‑β‑CDA和抗体2‑HRP混合,于37℃孵育15分钟,加入激发液后,检测1秒钟内产生的发光信号。3.根据权利要求2所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述步骤(4)的本底抑制剂为20mM羟基二乙胺溶液。4.根据权利要求2所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述步骤(4)的激发液为含有25mM  tris,15mM对羟基肉桂酸,0.5mM  EDTA,0.1%吐温‑20和200mM过氧化脲的混合溶液。5.根据权利要求2所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述步骤(4)中先对抗体1‑β‑CDA和抗体2‑HRP分别进行稀释,再按体积比为5:5:5:1加入稀释后的抗体1‑β‑CDA、稀释后的抗体2‑HRP、待测样品和本底抑制剂,于37℃孵育15分钟后,加入本底抑制剂10倍体积的激发液,检测1秒钟内产生的发光信号。6.根据权利要求2所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述方法还包括步骤(5)判定:以待测抗原的标准品为检测样本,配置梯度浓度的标准品溶液,进行步骤(4)的检测,绘制浓度‑发光信号曲线图,得到标准品的浓度‑发光信号公式。7.根据权利要求6所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述步骤(5)还包括将待测的检测样本进行步骤(4)检测并获得发光信号后,带入步骤(5)的浓度‑发光信号公式,得到待测的检测样本中的待测抗原的浓度。8.根据权利要求2所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述步骤(1)的具体制备方法为:称取1mg吖啶酯类似物A溶于1ml  DMF中,得到吖啶酯类似物溶液,将其加入1ml  1%β‑环糊精β‑CD水溶液中,37℃搅拌5小时,加入无水乙醇20ml,静置2小时后,将溶液加入截留分子量为1500的透析袋中,放于PBS缓冲液中25℃透析1天,期间更换3次PBS缓冲液,冷冻干燥制得β‑CDA;所述步骤(1)的操作过程避光。9.根据权利要求2所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特征在于,所述步骤(2)的具体制备方法为:将1mg发光包合物β‑CDA在2ml  DMF中溶解,取溶解的β‑CDA  50ul加入100ul浓度为10mg/ml的抗体1中,然后加入0.05M硼酸缓冲液800ul,1%戊二醛50ul,反应1小时;将反应溶液1ml加入截留分子量为10000的透析袋中,放于PBS缓冲液中4℃透析1天,期间更换3次PBS缓冲液,即可得到抗体1‑β‑CDA,最后用1ml保存液(PBS+0.05%Proclin‑300)置于‑20℃保存。10.根据权利要求2所述一种基于环糊精包合的免分离化学发光免疫分析的方法,其特

征在于,所述步骤(3)的具体制备方法为:称取0 .5mg  HRP溶解于100ul去离子水中,加入200ul新配的0.1M过碘酸钠溶液,避光搅拌30分钟;将上述反应液加入截留分子量为7000的透析袋中,放于1mM  PH4.4的醋酸钠缓冲液中4℃透析过夜;加入0.2M  pH9.5碳酸盐缓冲液20ul后,加入100ul浓度为10mg/ml的抗体2,然后加入0.01M碳酸盐缓冲液600ul,避光搅拌2小时;加100ul  4mg/ml硼氢化钠溶液,混匀后置于4℃2小时;将上述反应液加入SUPERDEX 200凝胶过滤柱纯化,收集纯化的抗体2‑HRP,最后用保存液置于‑20℃保存。