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专利号: 2021107222046
申请人: 武汉纺织大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括用于裂解细菌的裂解试剂组和用于提取质粒DNA的提取试剂组;

所述提取试剂组由磁珠结合液、洗涤液、洗脱液组成;所述磁珠结合液由乙酸钠、二硫苏糖醇、异硫氰酸胍和磁珠混悬液组成;所述磁珠结合液中,乙酸钠浓度为 0.2 M,二硫苏糖醇含量为1 wt%,异硫氰酸胍浓度为3 M;

所述磁珠混悬液中的磁珠表面修饰有硅羟基或硅羧基;

所述磁珠的粒径为0.5 1μm;

~

在所述磁珠结合液中,磁珠混悬液为磁珠与异丙醇按照质量比1:(5 20)混合配置而~成;所述磁珠结合液的pH值为7.5 8.5;

~

采用硅羟基或硅羧基磁珠、0.2 M的乙酸钠、1wt%的二硫苏糖醇和3 M的异硫氰酸胍的混合液作为磁珠结合液复配体系,磁珠对DNA的吸附过程只需要1分钟,即可有效提取细菌质粒DNA。

2.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒,其特征在于:所述裂解试剂组由菌体重悬液、裂解液、中和液组成;

菌体重悬液为包含10 20mM乙二胺四乙酸和25 35mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐的水溶~ ~液,pH值为7.0 8.0。

~

3.根据权利要求2所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒,其特征在于:所述裂解液为包含0.2 0.4 M氢氧化钠和质量分数1 3%十二烷基硫酸钠的水溶液;所述中和~ ~液为包含3 5 M乙酸钾和2 4 M乙酸的水溶液,pH值为4.0 6.0。

~ ~ ~

4.根据权利要求1所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒,其特征在于:所述洗涤液为体积分数75 85 %的异丙醇水溶液或乙醇水溶液;洗脱液为蒸馏水、去离子水、~超纯水中的一种。

5.一种细菌质粒DNA的快速提取方法,其特征在于:采用权利要求1至4中任一项权利要求所述的一种磁珠法快速提取细菌质粒DNA的试剂盒进行提取,包括如下步骤:步骤(1):取1 4 mL新鲜过夜培养的细菌培养液至离心管中,10000 12000 转/分钟离~ ~心1 5分钟,弃上清,加入100 200μL菌体重悬液,涡旋10 15秒,混匀菌液;

~ ~ ~

步骤(2):向步骤(1)得到的菌液中加入100 200μL裂解液,轻轻上下颠倒5 8次,再加入~ ~

150 250μL中和液,再次轻轻的上下颠倒5 8次后,立即10000 12000转/分钟离心3 5分钟,~ ~ ~ ~然后取上清100 300μL至新离心管中;

~

步骤(3):向步骤(2)新离心管中加入50 200μL磁珠结合液,涡旋10 15秒后静置1分钟,~ ~然后用磁力架进行磁分离,吸弃液体;

步骤(4):向步骤(3)离心管中加入200 700μL洗涤液,涡旋10 15秒后静置10 30秒,然~ ~ ~后用磁力架进行磁分离,吸弃液体,开盖室温静置5 10分钟;

~

步骤(5):向步骤(4)离心管中加入40 160μL洗脱液,涡旋10 15秒后静置1 3分钟,然后~ ~ ~用磁力架进行磁分离,吸取上清液体至新离心管中,提取得到细菌质粒DNA。

6.根据权利要求5所述的细菌质粒DNA的快速提取方法,其特征在于:步骤(2)中,加入裂解液并颠倒数次后,溶液变粘稠;加入中和液并颠倒数次后,溶液变成白色絮状;吸取液体时应保持离心管在磁力架上。