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专利号: 2021101651048
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.用于特异性识别利巴韦林的适配体,其特征在于,如下a)或b)所示:a)SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:7任一所示的核苷酸序列,b)在a)限定的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个碱基且具有特异性识别利巴韦林能力的由a)衍生的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的用于特异性识别利巴韦林的适配体,其特征在于,其5′端或3′端进行FITC、氨基、生物素或地高辛化学修饰。

3.一种筛选特异性识别利巴韦林的适配体的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备氨基化Fe3O4纳米磁珠,并用亲和素包被氨基化Fe3O4纳米磁珠;

(2)构建随机ssDNA文库,初始文库的长度是80bp,将初始ssDNA文库与互补短链Bio‑P1杂交;所述互补短链Bio‑P1,是指能够与文库中的ssDNA互补的、生物素标记的单链DNA;

(3)将与互补短链Bio‑P1杂交后的文库通过生物素与亲和素的作用,使得文库固定在亲和素包被的氨基化Fe3O4纳米磁珠表面;

(4)基于Capure‑SELEX方法的筛选利巴韦林适配体:向固定于磁珠表面的文库中加入利巴韦林并孵育,不与靶标结合或结合较弱的ssDNA留在磁珠上,与靶标结合的适配体进入上清液;

(5)对富集得到的序列进行高通量测序、分析,得到7条候选序列,通过金纳米比色法和碳点荧光淬灭法对候选适配体的亲和性、特异性进行表征,得到对利巴韦林具有亲和性、特异性的适配体。

4.根据权利要求3所述的一种筛选特异性识别利巴韦林的适配体的方法,其特征在于,步骤(4)还通过循环筛选来富集适配体,在循环筛选过程中,通过降低文库浓度、缩短孵育时间、增加反筛物质来增加筛选压力;反筛时,在加入靶标孵育之前,先加入结构类似物和共存物作为反筛物质与适配体进行孵育,与反筛物质结合的适配体序列进入上清液后被去除,不与反筛物质结合的序列留在磁珠上继续与靶标利巴韦林孵育富集。

5.用于检测利巴韦林的试剂盒,其特征在于,含有权利要求1或2所述的用于特异性识别利巴韦林的适配体。

6.根据权利要求5所述的用于检测利巴韦林的试剂盒,其特征在于,还含有碳点溶液或者用于制备碳点溶液的原料。

7.权利要求1或2所述特异性识别利巴韦林的适配体在检测利巴韦林中的应用。

8.权利要求5或6所述的试剂盒在检测利巴韦林中的应用。

9.根据权利要求7或8所述的应用,其特征在于,基于碳点荧光淬灭技术。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,用于检测蓄禽养殖动物体内、蓄禽养殖动物所用的食品和药品、人体血液中利巴韦林的含量。