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专利号: 2021101499816
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种催化长侧链芳香族胺与2‑酮丁酸合成L‑2‑氨基丁酸的方法,其特征在于,包括采用氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的ω‑转氨酶作为催化剂催化长侧链芳香族胺与2‑酮丁酸合成L‑2‑氨基丁酸。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,编码所述的ω‑转氨酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,催化反应的体系包括:1~5U/mL的ω‑转氨酶、5~15mM长侧链芳香族胺与5~15mM 2‑酮丁酸。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,催化反应的条件是在25~40℃、pH 7~8条件下搅拌反应。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,催化反应通过加酸进行终止反应。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的ω‑转氨酶通过如下方法进行制备:(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的ω‑转氨酶编码基因与质粒连接后转入宿主菌中,得到表达ω‑转氨酶的重组菌;

(2)采用步骤(1)构建的重组菌诱导发酵生产得到含有ω‑转氨酶的发酵粗酶液;

(3)将步骤(2)的发酵粗酶液进行纯化得到ω‑转氨酶。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的宿主菌为大肠杆菌。

8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的质粒为pET28a(+)。

9.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的诱导发酵是在发酵至OD为0.5~0.7时,加入IPTG在15~18℃进行低温诱导产酶。

10.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述的纯化包括采用镍离子亲和层析柱上样,咪唑作为流动相进行梯度洗脱;洗脱液经G25脱盐柱脱盐后超滤浓缩。