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专利号: 2021100843093
申请人: 宜宾五粮液股份有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于,包括以下步骤:

a、提取浓香大曲粗酶液并测定粗酶液中的各种酶活;具体的提取粗酶液的操作为:将浓香大曲破碎后,用Tris‑HCL作为溶剂进行提取,大曲与Tris‑HCL溶剂的加入量为液固比为1︰5~10,提取过程中的pH值为5.0~7.0,提取时间为0.5~2h;

b、提取宏蛋白样品并采用宏蛋白质组学技术进行解析;

提取的具体操作步骤为:在大曲样品中加入BPP提取液,震荡、离心后取上清液,加入同体积的Tris‑饱和酚溶液,再次震荡离心获得含有蛋白的酚层,再加入相同体积的BPP提取液,震荡离心取上清液,加入等体积的乙酸铵甲醇溶液,‑20℃过夜沉淀蛋白,在沉淀中加入丙酮,离心去上清,采用裂解液溶解蛋白,得到待测样品;

提取样品的酶解:将提取的蛋白,加入二硫苏糖醇,37℃孵育1h;冷却至室温,加入碘乙酰胺,室温放置30min;加入胰酶37℃恒温过夜,加入甲酸终止酶切,收集消化后的馏分,保存在‑80℃下进行MS分析;

c、将宏蛋白质组学技术解析结果与酶活测定结果进行对比。

2.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于:步骤a中所述的酶包括:α‑淀粉酶,蛋白酶,纤维素酶或果胶酶中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于:步骤b中加入的大曲样品与BPP提取液的比例为0.4g︰1mL。

4.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于:步骤b中所述的裂解液为含有8M尿素的裂解液。

5.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于:步骤b中所述的二硫苏糖醇的终浓度为10mM。

6.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于:步骤b中所述的碘乙酰胺的终浓度为30mM。

7.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于:步骤b中所述胰酶的加入量为:胰酶与蛋白的质量比为1︰25。

8.根据权利要求1所述的基于宏蛋白质组学技术对浓香大曲进行酶系结构解析的方法,其特征在于:步骤b中所述的甲酸的浓度为0.1%。