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专利号: 2020114874603
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于纳米酶检测组蛋白乙酰转移酶的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

(1)将不同浓度的组蛋白乙酰转移酶溶液与乙酰辅酶A、底物肽混合,孵育;孵育结束后,加入辅酶A适配体,继续进行孵育;孵育结束后,再加入限制性核酸外切酶I,继续进行孵育,孵育结束后,获得相应的混合溶液;

(2)向步骤(1)所得含不同浓度的组蛋白乙酰转移酶的混合溶液中加入CuBi2O4溶液,孵育;孵育结束后,加入K4[Fe(CN)6]、特征显色底物3,3’,5,5’―四甲基联苯胺、缓冲溶液和H2O2,继续孵育;孵育结束后,使用酶标仪进行光谱扫描,获得不同浓度相应的吸光度值A;同时,测定HAT p300浓度为0时测得的吸光度值A0,计算二者差值得到不同浓度相应的吸光度增值(A‑A0);

(3)利用组蛋白乙酰转移酶的浓度与吸光度增量构建线性关系,得到线性测定模型。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(2)中CuBi2O4通过如下方法制得:将铋盐分散在含浓硝酸的水中,获得澄清溶液,然后向其中滴入铜盐溶液,最后加入碱液,混匀形成含蓝绿色沉淀的混合体系;将混合体系转移至高压釜中进行反应;反应结束后,洗涤、干燥,得到棕色粉末CuBi2O4产物。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,铜盐与铋盐的摩尔比为1:(1‑5)。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的铋盐选自氯化铋或硝酸铋;铜盐选自硝酸铜或硫酸铜。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述反应的温度为100‑180℃;反应的时间为14‑24h。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中底物肽的组成为:RGKGGKGLGKGGAKA。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)是将20μL不同浓度的组蛋白乙酰转移酶溶液,20μL 1.0mmol/L的乙酰辅酶A,20μL 1.0mmol/L的底物肽混合,在20~40℃下孵育50‑90min。

8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)是加入20μL 0.1mmol/L辅酶A适配体溶液进行孵育;孵育条件是在20~40℃下孵育6‑12h。

9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)是加入20μL 5.0U/mL限制性核酸外切酶I溶液进行孵育;孵育条件是在30~40℃下孵育30‑90min。

10.根据权利要求1‑9任一项所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:按照步骤(1)和步骤(2),对待测样品进行孵育处理,测得相应的吸光度增量;然后通过步骤(3)的线性测定模型,计算得到待测样品中HAT p300的浓度含量。