1.一株环肽抗生素缬氨霉素高产菌株——链霉菌 IFE‑v1m38(Streptomyces sp. IFE‑v1m38),保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏编号CGMCC No. 20046,保藏日期:2020年06月08日。
2.权利要求1所述链霉菌IFE‑v1m38在微生物发酵制备油菜菌核病菌抗菌剂中的应用。
3.权利要求1所述链霉菌IFE‑v1m38在微生物发酵制备缬氨霉素(Valinomycin)中的应用,所述缬氨霉素结构如下式所示:
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4.一种利用权利要求1所述链霉菌IFE‑v1m38微生物发酵制备缬氨霉素的方法,其特征在于所述方法包括:将链霉菌 IFE‑v1m38(Streptomyces sp. IFE‑v1m38)接种至发酵培养基,在温度26 30 ℃、转速 150 500 rpm、通气量0 4.0 vvm条件下,氨水调控pH 7.0 7.4,~ ~ ~ ~
进行发酵培养48 192 h,获得含有缬氨霉素的发酵液、经分离纯化获得所述缬氨霉素。
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5.如权利要求4所述的方法,其特征在于所述发酵培养基组成如下:黄豆饼粉 5 30.0 ~
g/L,可溶性淀粉 5 20.0 g/L,葡萄糖 5 30 g/L,胰蛋白胨1 10.0 g/L,酵母提取物1 10.0 ~ ~ ~ ~
g/L,牛肉浸膏 0.5~5.00 g/L,NaCl 0.1~5.0 g/L,MgSO4·7H2O 0.1~1.5 g/L,K2HPO4·3H2O
0.1~1.5 g/L,CaCO3 0.5~5.0 g/L,FeSO4·7H2O 0.001~0.02 g/L,0.1~3.0 ‰消泡剂,121℃灭菌10 20min。
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6.如权利要求4所述的方法,其特征在于所述链霉菌 IFE‑v1m38(Streptomyces sp. IFE‑v1m38)先接种至种子培养基进行培养获得种子液,种子液再接种至发酵培养基进行发酵培养,所述种子培养基组成如下:酵母提取物5 20.0 g/L,牛肉膏 1 15.0 g/L, NaCl ~ ~
0.1~2.0 g/L,MgSO4·7H2O 0.1~2.0 g/L,K2HPO4·3H2O 0.1~2.0 g/L, FeSO4·7H2O 0.001
0.02 g/L
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7.如权利要求4所述的方法,其特征在于所述分离纯化方法如下:含有缬氨霉素的发酵液加1 3‰ 絮凝剂聚氯化铝,真空泵抽滤固液分离,得到菌丝体用纯甲醇反复浸泡抽提3 5~ ~
次,抽提物浓缩后,再用乙酸乙酯反复萃取2 4次、饱和NaCl溶液水洗1 3次、分液漏斗静置~ ~
分层,真空旋转蒸发仪浓缩有机相,样品用真空干燥仪除水;采用200 300目的硅胶柱层析,~
样品的上样量与硅胶用量比例为1.0 :30~60,用0~100 %的MeOH‑CHCl3梯度洗脱,选择有活性的组分通过制备TLC进一步分离纯化,展开剂为MeOH:CHCl3=20:80;再采用Shimadzu LC‑
20AP制备液相分离纯化收集的活性物质,柱层析,以甲醇:1 ‰ 三氟乙酸水溶液= 90:10为流动相,柱温25℃,检测波长210 nm,流速为2.0 mL/min;收集的活性组分在真空旋转蒸发仪浓缩和冷冻干燥后得到白色固体,即为所述缬氨霉素。