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专利号: 2020109323403
申请人: 常州大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2025-12-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于共振能量转移的电化学发光法检测己烯雌酚的传感器,其特征在于:包括作为能量共振转移中的供体Ag3PO4/Cu-MOF复合材料,作为能量共振转移中的受体的Ag NPs,所述Ag3PO4/Cu-MOF复合材料和Ag NPs之间通过两条DNA链连接并共同修饰在玻碳电极上,其中一条DNA链为适配体(apt),另一条DNA链连接受体,得到AgNPs-cDNA/apt/Ag3PO4/Cu-MOF/GCE传感器。

2.如权利要求1所述的基于共振能量转移的电化学发光法检测己烯雌酚的传感器,其特征在于:适配体如下所示:适配体核苷酸序列:5'-GGC GAT GGG GTA GGG GGT GTG GAG GGG CCG GAC GGA GGG G NH2-3';

cDNA序列:SH-(CH)2-5'-CCC-CTC-CGT-CCG-GCC-CCT-CCA-3'。

3.如权利要求1所述的基于共振能量转移的电化学发光法检测己烯雌酚的传感器的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)Ag3PO4/Cu-MOF复合材料的制备:

分别制备Ag3PO4和新型Cu-MOF,将制得的新型Cu-MOF和Ag3PO4加入溶剂中,超声分散均匀后,再在磁力搅拌器中搅拌,搅拌完成后离心分离并分别用有机溶剂和去离子水洗涤,再经干燥制得黄灰色粉末,即Ag3PO4/Cu-MOF复合材料,并将Ag3PO4/Cu-MOF复合材料分散在DMF中以备使用;

(2)Ag NPs-cDNA胶体溶液的制备:

将含有cDNA的Tris-H3PO4溶液加入体积含量为50%的Ag NPs水溶液中,静置反应后,离心并取沉淀加入Tris-H3PO4,控制pH为7.5,经超声处理,并在室温下震荡,制得Ag NPs-cDNA胶体溶液,Ag NPs-cDNA胶体溶液于低温下储存备用;所述cDNA为用于连接受体的DNA链;

(3)基于共振能量转移的电化学发光传感器的制备:

将含有NHS和EDC的PBS缓冲液涂滴在干净的裸玻碳电极上,获得活化的玻碳电极,随后,将步骤(1)制得的所述Ag3PO4/Cu-MOF复合材料的DMF分散液滴加在活化的玻碳电极上,得到Ag3PO4/Cu-MOF/GCE修饰电极;然后,再涂滴含有NHS和EDC的PBS缓冲液于Ag3PO4/Cu-MOF/GCE修饰电极上,活化新型Cu-MOF中的羧基;最后,依次滴涂含有适配体(apt)的Tris-H3PO4溶液和Ag NPs-cDNA胶体溶液,得到所述基于共振能量转移的电化学发光传感器Ag NPs-cDNA/apt/Ag3PO4/Cu-MOF/GCE;所述适配体为用于连接供体的DNA链。

4.如权利要求3所述的基于共振能量转移的电化学发光法检测己烯雌酚的传感器的制备方法,其特征在于:步骤(1)新型Cu-MOF和Ag3PO4的质量比为2:1;步骤(3)Ag3PO4/Cu-MOF分散液浓度为3.0mg/mL;适配体的浓度为2.0μmol/L,AgNPs-cDNA胶体溶液的浓度为2μmol/L;Ag3PO4/Cu-MOF分散液、适配体溶液、Ag NPs-cDNA胶体溶液的体积比为5:2:3。

5.如权利要求1所述的基于共振能量转移的传感器在电化学发光法检测己烯雌酚中的应用,其特征在于:所述检测方法具体步骤如下:(1)含过硫酸钾(K2S2O8)的磷酸盐(PBS)缓冲溶液的配制;

(2)含不同浓度己烯雌酚和0.1mol/LK2S2O8的PBS缓冲溶液的配制;

-4

准确称取一定量的己烯雌酚,用乙醇配制1.0×10 mol/L溶液,将一定量己烯雌酚溶液加入含0.1mol/LK2S2O8的0.1mol/LpH=8的PBS缓冲溶液中,得到一系列不同浓度的己烯雌酚标准溶液,浓度范围为1.0×10-12mol/L~1.0×10-4mol/L;

(3)标准曲线的绘制

将修饰电极Ag NPs-cDNA/apt/Ag3PO4/Cu-MOF/GCE作为工作电极,铂电极作为辅助电极,Ag/AgCl作为参比电极,组成三电极体系,将三电极体系置于上述含一系列不同浓度己烯雌酚和0.1mol/L K2S2O8的PBS缓冲溶液溶液中浸泡一定时间,并以含有0.1mol/L的K2S2O8的pH=8的0.1mol/L PBS缓冲液作为空白溶液检测发光强度;

在-1.8~0V的电化学窗口范围内,光电倍增管高压800V,扫速0.1V/s,进行循环伏安扫描,记录电位-发光强度曲线(E-ECL),建立加入己烯雌酚前后的发光强度差值与己烯雌酚浓度对数值的线性关系,得到相应的线性回归方程;

(4)实际样品检测

实际样品检测先作前处理再调节pH,按照上述步骤(3)中的线性回归方程进行计算。

6.根据权利要求5所述的基于共振能量转移检测己烯雌酚的电化学发光方法,其特征在于:步骤(3)所述的PBS缓冲溶液含0.1mol/L K2S2O8,PBS缓冲溶液的pH为8,其浓度为

0.1mol/L,修饰电极Ag-cDNA/apt/Ag3PO4/Cu-MOF/GCE浸泡时间为50min。

7.根据权利要求5所述的基于共振能量转移检测己烯雌酚的电化学发光方法,其特征在于:最低检测限为7.2×10-13mol/L。