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专利号: 202010919767X
申请人: 湖南工程学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-12-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.基于DNA walker和G-四链体-血红素DNA酶检测EB病毒的序列组合,包括DNA步行者探针、轨道分子、保护序列、序列1和序列2;

所述DNA步行者探针的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示;

所述轨道分子的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示;

所述保护序列的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示;

所述序列1的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示;

所述序列2的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

2.一种非诊断目的地基于权利要求1所述的序列组合检测EB病毒的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)将所述DNA步行者探针和保护序列在95℃下处理5min、冷却,得到互补序列;

2)将所述轨道分子在95℃下处理5min、冷却,得到发夹结构;

3)将所述步骤1)得到的互补序列和步骤2)得到的发夹结构固定在微球上、封闭,得到固定有互补序列和发夹结构的微球;

4)将所述序列1固定在微球上、封闭,得到固定有序列1的微球;将所述序列2固定在微球上、封闭,得到固定有序列2的微球;

5)将所述步骤3)得到的固定有互补序列和发夹结构的微球与待测样品进行反应,得到反应物,将所述反应物离心,得到上清液;

6)将所述步骤4)得到的固定有序列1的微球与步骤5)得到的上清液杂交,得到杂交物;

将所述步骤4)得到的固定有序列2的微球与Cutsmart Buffer混合,得到混合物;将所述杂交物和混合物混合后进行孵育、离心,得到上清液;

7)将所述步骤6)得到的上清液与ABTS、双氧水混合后进行反应,在420nm处测量吸光度值,定义ΔA420nm=A420nm-A0,其中A420nm为待测样品的吸光度值,A0为EB病毒DNA浓度为0时的吸光度值,将得到的ΔA420nm值代入ΔA420nm=0.107+0.002CEB病毒DNA中,得到待测样品中EB病毒的含量。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤1)DNA步行者探针与保护序列的摩尔比为1:4~7。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤3)互补序列和发夹结构的摩尔比为1:15~25。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤3)固定的条件包括:所述固定的温度为25~30℃,所述固定的时间为30min。

6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤3)固定有互补序列和发夹结构的微球的表面修饰有1.2×106~1.9×106个互补序列,修饰有2.8×107~2.9×107个发夹结构。

7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤4)固定的条件包括:所述固定的温度为25~30℃,所述固定的时间为30min。

8.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤5)反应的体系每20μL包括10μL固

2+

定有互补序列和发夹结构的微球、4μL 5×HEPES reactionbuffer、0.5μLZn 、1.5μL DEPC-H2O和4μL待测样品;

所述反应的条件包括:在37℃下反应1h。

9.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤6)固定有序列1的微球与上清液的体积比为1:1;所述固定有序列2的微球与Cutsmart Buffer的体积比为1:1。

10.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述步骤7)上清液与ABTS、双氧水的体积比为1:4.5:4.5;

所述反应的条件包括:在37℃下反应8min。