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专利号: 2020106353835
申请人: 贝勒知临(杭州)生物技术有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-12-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.人乳头瘤病毒病毒样颗粒在制备用于识别和分离人乳头瘤病毒易感细胞的产品中的用途,所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒是指HPV病毒中的L1和L2共表达后可自行组装成不含病毒DNA的病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述人乳头瘤病毒易感细胞选自胎儿滋养层细胞或上皮组织来源肿瘤细胞。

3.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述产品用于识别和分离血液样品中的人乳头瘤病毒易感细胞。

4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于:所述血液样品为外周血样品。

5.根据权利要求4 所述的用途,其特征在于:所述外周血来自孕妇或者肿瘤/疑似肿瘤患者。

6.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒携带有报告基因和/或用于分离目的细胞的蛋白标签表达基因。

7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述报告基因和/或蛋白标签表达基因位于表达载体中,所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒携带有所述表达载体。

8.根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述报告基因选自荧光蛋白、荧光素酶、抗生素抗性蛋白或者特异性膜蛋白受体的基因中任一。

9.根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述蛋白标签选自HA‑tag、Flag、His、GST、MBP、His‑MBP、Myc、His‑Myc、Sumo、His‑sumo、SNAP‑tag、halo‑tag、可被生物素化标签、可被亲和素化标签或可被链霉亲和素化标签中任一。

10.根据权利要求6所述的用途,其特征在于:所述蛋白标签表达基因选自可被生物素化标签表达基因,所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒还携带有生物素连接酶表达基因和共表达序列,所述可被生物素化标签表达基因与生物素连接酶表达基因通过共表达序列在目的细胞中共表达。

11.根据权利要求10所述的用途,其特征在于,还包括以下特征的任一项或多项:(1)所述生物素连接酶表达基因的序列如SEQ ID NO.21所示;(2)所述共表达序列为IRES;(3)所述可被生物素化标签为Avi‑tag。

12.根据权利要求7所述的用途,其特征在于:所述表达载体中还含有表达跨膜蛋白的跨膜蛋白表达基因,所述跨膜蛋白表达基因与所述报告基因和/或蛋白标签表达基因融合表 达,以将所述报告基因和/或蛋白标签表达基因跨过细胞膜在目的细胞的细胞膜上或细胞膜外表达。

13.根据权利要求7所述的用途,其特征在于:所述表达载体中还含有表达具有膜定位功能蛋白的基因片段,用于识别定位目的细胞的细胞膜位置。

14.根据权利要求7所述的用途,其特征在于:所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒携带的表达载体中含有如SEQ ID NO.11所示序列,或所述表达载体同时含有SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22 所示序列。

15.一种分离人乳头瘤病毒易感细胞的方法,所述方法包括:

1) 用游离细胞捕获探针转染含有待检测细胞的样品;

2) 继续培养;

3) 分离目的细胞;

所述游离细胞捕获探针包括:人乳头瘤病毒病毒样颗粒,所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒携带有报告基因和/或用于分离目的细胞的蛋白标签,所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒是指HPV病毒中的L1和L2共表达后可自行组装成不含病毒DNA的病毒样颗粒。

16.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:所述人乳头瘤病毒易感细胞选自胎儿滋养层细胞或上皮组织来源肿瘤细胞。

17.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:所述步骤 1)中待检测细胞为经过预处理的血样样品,所述预处理是指去除样品中的血细胞。

18.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:所述游离细胞捕获探针转染至目的细胞后,在目的细胞的细胞膜外表面表达蛋白标签,通过蛋白标签分离目的细胞或者通过能与报告蛋白结合的抗体分离目的细胞。

19.根据权要求18所述的方法,其特征在于:所述蛋白标签选自可被生物素化标签,所述游离细胞捕获探针在目的细胞的细胞膜外表面和细胞内共表达可被生物素化标签和生物素连接酶。

20.根据权要求15所述的方法,其特征在于:步骤3)中添加生物素,通过亲和素或亲和链霉素免疫磁珠分离目的细胞。

21.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:所述报告基因位和/或蛋白标签表达基因位于表达载体中;所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒携带有所述表达载体。

22.根据权利要求21所述的方法,其特征在于:所述表达载体还包含适用于在哺乳动物细胞表达的启动子。

23.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:所述报告基因选自荧光蛋白、荧光素酶、抗生素、抗性蛋白或者特异性膜蛋白受体的基因中任一。

24.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:所述蛋白标签选自HA‑tag、Flag、His、GST、MBP、His‑MBP、Myc、His‑Myc、Sumo、His‑sumo、SNAP‑tag、halo‑tag、可被生物素化标签、可被亲和素化标签或可被链霉亲和素化标签中任一。

25.根据权利要求24所述的方法,其特征在于:所述蛋白标签表达基因选自可被生物素化标签表达基因,所述可被生物素化标签表达基因与生物素连接酶表达基因通过共表达序列在目的细胞中共表达。

26.根据权利要求25所述的方法,其特征在于:还包括以下特征的任一项或多项:(1)所述生物素连接酶表达基因的序列如SEQ ID NO.21所示;(2)所述共表达序列为IRES;(3)所述可被生物素化标签为Avi‑tag。

27.根据权利要求21所述的方法,其特征在于:所述表达载体中还含有表达跨膜蛋白的跨膜蛋白表达基因,所述跨膜蛋白表达基因与所述报告基因和/或蛋白标签表达基因融合表达,以将所述报告基因和/或蛋白标签表达的蛋白跨过细胞膜锚定在目的细胞的细胞膜外。

28.根据权利要求21所述的方法,其特征在于:所述表达载体中还含有表达具有膜定位功能蛋白的DNA片段,用于识别定位目的细胞的细胞膜。

29.根据权利要求21所述的方法,其特征在于:所述人乳头瘤病毒病毒样颗粒携带的表达载体含有如SEQ ID NO.11所示序列,或所述表达载体同时含有SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示序列。