1.一种基于环金属铱配合物敏化NiO的光电化学免疫传感器用于检测前列腺特异性抗原的制备方法;采用水热合成法在ITO电极上制备纳米NiO薄膜,然后将光敏剂环金属铱配合物[Ir(C6)2(dcbpy)]+PF6-(其中C6为香豆素6,dcbpy为2,2'-联吡啶-4,4'-二羧酸)通过缩合作用固定在纳米NiO膜表面;进而借助壳聚糖和戊二醛将前列腺特异性抗原捕获抗体共价键合在修饰电极上制得传感工作电极。通过前列腺特异性抗原和抗体之间的特异性免疫反应,实现对前列腺特异性抗原的检测,包括以下步骤:(1)纳米NiO修饰ITO电极的制备:将面积固定的ITO电极(0.5cm×4.0cm)依次放入盛有
10mL无水乙醇、丙酮及超纯水中,超声清洗10分钟,自然干燥。将清洗干净的ITO玻璃浸入
400μL含0.1~0.5M Ni(NO3)2·6H2O和0.1~0.5M六亚甲基四胺的水溶液的离心管中,80~
100℃加热150~300分钟,冷却至室温后,用超纯水洗涤冲洗,在氮气氛围下干燥。然后将ITO电极放置到马弗炉中300~400℃并保持30~50分钟,升温速率为5℃/分钟,自然降温,制得NiO修饰ITO电极(ITO/NiO)。
(2)传感工作电极的制备:将制备的ITO/NiO电极浸入浓度为1×10-5~10-4M的[Ir(C6)2(dcbpy)]+PF6-DMF溶液中反应12~18小时,分别用DMF和CH3CN洗涤,放入恒温干燥箱37℃下干燥。干燥的电极固定有效的传感面积为0.5cm×0.5cm后,滴涂0.1%壳聚糖的乙酸溶液,干燥后滴涂20μL 5~10%(体积分数)的戊二醛(GLD)溶液,用PBS缓冲溶液进行清洗。将20μL浓度为100μg/mL的前列腺特异性抗原抗体滴涂在电极表面,并在4℃下孵育12小时,进而滴加20μL牛血清蛋白溶液(1%(w/v))进行封板,制得用于检测前列腺特异性抗原的传感工作电极。
(3)光电信号检测:制得的传感工作电极浸入不同浓度的前列腺特异性抗原溶液中,37℃孵育1小时,冲洗后进行光电流检测。光电流检测采用三电极系统:传感工作电极,铂丝电极作为辅助电极,Ag/AgCl电极作为参比电极。在激发光475nm下,0.1M的PBS缓冲溶液(pH=
7.4)作为检测液,偏置电压为-0.3~0V,光源开启和关闭时间均为20s。
2.根据权利要求1所述方法制备得到的光电化学传感器在检测前列腺特异性抗原中的应用。