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专利号: 2020104915607
申请人: 沈阳农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效快速测定浆果果汁中有机酸含量的方法,其特征在于:包括下述工艺步骤:

配制浆果中常见的有机酸标准溶液,利用超高效液相色谱质谱联用仪建立测定有机酸标准品的方法条件;根据有机酸标准溶液的浓度和峰面积建立相应有机酸浓度‑峰面积标准曲线;利用上述测定有机酸标准品的方法条件获得待测浆果果汁中各个有机酸的峰面积,通过有机酸浓度‑峰面积标准曲线计算待测浆果果汁中各种有机酸的浓度,其中,所述有机酸标准品为绿原酸、表儿茶素、丁香酸、奎宁酸、柠檬酸、莽草酸、没食子酸、2,4,6‑三羟基苯甲醛、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸;所述方法17min内同时检测上述12种有机酸;

利用超高效液相色谱质谱联用仪建立测定有机酸标准品的方法条件如下:

液相条件:色谱柱:Thermo AQUASIL C18 250mm×4.6mm;进样量:2μL;柱温:30℃;流速:0.6mL/min;流动相A为0.1%的甲酸水溶液,流动相B为甲醇;梯度洗脱条件:0‑5min:甲醇10%;5‑16min:甲醇10%‑100%;后运行2min;

质谱条件:采用多反应监测,负离子扫描模式,干燥气温度325℃;干燥气流速7L/min;

鞘气温度350℃;鞘气流速11L/min。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述有机酸标准溶液按下述方法配置:用超纯水定容成为浓度5.0mg/mL的混合标准溶液,再分别稀释成浓度为0.5、1.0、2.0、4.0mg/mL的混合标准溶液。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述方法还包括验证建立的检测方法的重复性、回收率、精密度、定量限、检出限和校准曲线。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述定量限、检出限及校正曲线按下述方法验证:将有机酸标准溶液分别用超纯水稀释到相应的浓度范围,其中,绿原酸10‑6000ng/mL,表儿茶素5‑200ng/mL,丁香酸20‑6000ng/mL,奎宁酸5‑80000ng/mL,柠檬酸10‑80000ng/mL,莽草酸10‑4000ng/mL,没食子酸5‑2000ng/mL,2,4,6‑三羟基苯甲醛10‑200ng/mL,酒石酸5‑

4000ng/mL,苹果酸10‑20000ng/mL,琥珀酸5‑5000ng/mL,乳酸5‑10000ng/mL,进行超高效液相色谱质谱联用分析,将浓度作为横坐标,峰面积作为纵坐标绘制校正曲线,得到相关系数r,从而判断线性关系;在信噪比为3和10时,对不同浓度的有机酸进行分析,并计算得到定量限和检出限。

5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:所述精密度按下述方法验证:

通过测定日内和日间的变化情况,评价所建立方法的精密度;相对标准差为变异值,具体操作为:将混合标准溶液,在同一天内连续5次测定浓度为0.5mg/mL的12种有机酸混合标准溶液的浓度,根据测定的含量差异来评价日内精密度,连续5天之间的含量差异用来评价日间精密度。

6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:精确度按下述方法验证:

通过回收实验计算回收率,对方法的准确性进行评价,具体操作为:分别将不同浓度的

12种有机酸标准溶液,分别是混合标准溶液相应浓度的0.5,1.0和2.0倍加入混合标准溶液中,测定每种有机酸标准品的回收率,并进行三次重复实验。

7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:重现性和稳定性按下述方法验证:

测定混合标准溶液在4℃下2、4、8、24和48h的稳定性,将不同时间下的测定结果与初始结果进行比较;并对12种有机酸的重现性和稳定性进行相对标准差分析。