1.一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、对待测活性污泥进行离心分离,收集固体样品;采用缓冲溶液对固体产物进行反复冲洗;对冲洗后的固体样品定容,至待测活性污泥的原始容积,并混合均匀,得到活性污泥样品;
步骤2、在厌氧条件下,对活性污泥样品进行破碎,离心,得到上清液,上清液即为待测氧化亚氮还原酶样品;
步骤3、在厌氧状态下,向密闭容器中加入缓冲溶液、甲基紫精溶液及连二亚硫酸钠溶液,并充入氧化亚氮气体,震荡,静置,得到试剂液;在试剂液中加入步骤2中的待测氧化亚氮还原酶样品,震荡反应后,利用气相色谱法,测定氧化亚氮的含量,进而得到氧化亚氮还原酶的活性。
2.根据权利要求1所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,步骤1和步骤3中,缓冲溶液采用在Tris-HCL缓冲液中加入MgCl2配制得到,其中,Tris-HCL缓冲液的浓度为20-25mM,MgCl2的浓度为5-50mM;缓冲溶液的pH为7.5-8.5。
3.根据权利要求1所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,步骤1中,离心分离过程,离心转速为4000-5000r/min,离心时间为5-15min;步骤2中,离心分离过程,在40000-186400g条件下,离心时间为30-90min。
4.根据权利要求1所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,步骤1及步骤2的温度条件为4℃以下。
5.根据权利要求1所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,步骤2中,对活性污泥样品采用超声波破碎法进行破碎。
6.根据权利要求2所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,步骤3中,试剂液中缓冲溶液、甲基紫精溶液及连二亚硫酸钠溶液的体积比为3.5:
0.5:1.0;甲基紫精溶液的浓度为10-15mM,连二亚硫酸钠溶液的浓度为100-150mM。
7.根据权利要求6所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,充入氧化亚氮气体的浓度为10-15mol/m3。
8.根据权利要求1所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,步骤3中,制备试剂液过程,将密闭容器置于恒温培养摇床上进行震荡,温度为28-
30℃,震荡转速为150-180r/min,震荡时间为10-20min;静置时间为5-10min。
9.根据权利要求1所述的一种活性污泥中氧化亚氮还原酶提取及活性测定方法,其特征在于,步骤3中,在试剂液中加入待测氧化亚氮还原酶样品后,在恒温培养摇床上剧烈震荡反应,温度为28-30℃,震荡转速为150-180r/min,震荡反应时间为30-60min。