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专利号: 202010455589X
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-12-31
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高大肠杆菌重组蛋白胞外分泌水平的方法,其特征在于,通过同源重组的方法将包含1‑4个SD序列的基因片段整合至编码D‑丙氨酰‑D‑丙氨酸羧肽酶DacA的启动子与DacA编码基因之间;

编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示;

距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG序列的距离为0‑10bp。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述大肠杆菌是E. coliBL 21、E.coli JM109、E.coli DH5α、E.coli Rosetta、E.coli TOP10、E.coli M110或E.coli S110。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)设计并合成含有抗性基因及待整合基因上下游同源臂的整合框;所述待整合基因包括编码D‑丙氨酰‑D‑丙氨酸羧肽酶DacA的启动子,所述上下游同源臂中包括1‑4个SD序列;

(2)将所述整合框电转化至含有质粒载体的大肠杆菌感受态细胞,同源重组后筛选出基因整合的大肠杆菌,并消除抗性基因。

4.一种重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌中,编码D‑丙氨酰‑D‑丙氨酸羧肽酶DacA的启动子和DacA编码基因之间整合有1‑4个SD序列;

编码所述SD序列的核苷酸序列如SEQ ID No .1所示;

距离DacA初始密码子ATG最近的SD序列与初始密码子ATG的距离为0‑10bp。

5.权利要求4所述的重组大肠杆菌在重组蛋白胞外生产中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述重组蛋白包括淀粉酶、绿色荧光蛋、胶原蛋白、果糖基转移酶、甲基对硫磷水解酶、过氧化氢酶和葡萄糖氧化酶中的一种或几种。