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专利号: 2020102048335
申请人: 临沂大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2026-04-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述SCAR分子标记引物序列为Ginkgo SexD-F5R5。

2.根据权利要求1所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述SCAR分子标记引物序列中上游引物序列F5:GAGTTGATGTGATTCTTGGAGA,下游引物序列R5:CATTTGGTTCAAACACCTTACT。

3.根据权利要求1所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述引物对在银杏雌雄株性别早期鉴定方面的应用。

4.根据权利要求3所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述应用中,先是提取待鉴定样品的基因组DNA,再进行PCR扩增。

5.根据权利要求4所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述待测鉴定样品基因组DNA提取方法包括以下步骤:

S1、选择本地已知性别的银杏雌、雄树各10株,取其幼嫩的叶片,采用液氮速冻备用;

S2、利用CTAB法提取银杏叶片DNA。

6.根据权利要求4所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述PCR扩增的反应体系为:反应体积20uL,包括2×Mix Master为10uL,银杏DNA为2uL,SCAR分子标记上下游引物各0.5uL,ddH2O7uL。

7.根据权利要求4所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述应用中PCR扩增的反应程序为:94℃预变性3min;94℃变性30s;60℃退火30s;72℃延伸

30s;循环30次;72℃延伸10min;结束反应,扩增产物置于冰箱4℃保存。

8.根据权利要求4所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述PCR扩增中的PCR仪器型号不受限制,任意一台PCR仪均可完成。

9.根据权利要求3所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述应用中电泳鉴定扩增产物,10株银杏雄株均能扩增出一条297bp的特异条带而10株雌株均无扩增条带,由此可鉴定银杏雌株和雄株。

10.根据权利要求9所述的一种银杏雌雄株性别早期鉴定的SCAR标记方法,其特征在于:所述银杏雄株特异条带鉴定:经测序,特异条带的DNA序列为:GAGTTGATGTGATTCTTGGAGAGTAGTGGCTTAGAACACTAGAGACCTTCTCAATGAACTTAGAAGAGTTCTTCATTAAGTTTAATCTATAAGGAAAAGTGTATAAGTTGAGAGGATTGGTTGCACCACCACTAAATCAAGTAATTAATTATCATATGATGGAGAAGTTGATTAAAAAGGGTGCTACTAGCATCATTATGAGGTGCTACTCTATTGAAGGGTGTGAAGAATAGGAATCAATCACACTATAGCTACAGGAAGTTATTTCTTAACATAGTAAGGTGTTTGAACCAAATG。