欢迎来到知嘟嘟! 联系电话:13336804447 卖家免费入驻,海量在线求购! 卖家免费入驻,海量在线求购!
知嘟嘟
我要发布
联系电话:13336804447
知嘟嘟经纪人
收藏
专利号: 2020100582671
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-10-10
缴费截止日期: 暂无
价格&联系人
年费信息
委托购买

摘要:

权利要求书:

1.一种生物合成L‑2‑氨基丁酸的方法,其特征在于,以L‑谷氨酸为底物,以双酶串联体系催化L‑谷氨酸生成L‑2‑氨基丁酸;所述双酶是L‑谷氨酸变位酶和L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶;

所述双酶串联体系中,底物L‑谷氨酸的浓度为10‑30mmol/L;L‑谷氨酸变位酶和L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶按照4‑6:1的质量比添加到双酶串联体系中,其中,所述L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的用量为0.5‑5 mg/mL;

编码所述L‑谷氨酸变位酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 5所示;

所述L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述双酶串联体系中,底物L‑谷氨酸的浓度是10‑20 mmol/L,L‑谷氨酸变位酶和L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶按照4‑6:1的质量比添加到双酶串联体系中。

3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的用量为2‑3 mg/mL。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述双酶串联体系中还含有0.5‑1.5 mmol/L二硫苏糖醇、0.5‑1 mmol/L的磷酸吡哆醛、0.01‑0.02 mmol/L的腺苷钴胺素、1‑1.5 mmol/Lα‑酮戊二酸以及18‑22 mM pH 6.5‑7.5的K2HPO4/KH2PO4缓冲液。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,催化反应的温度为35‑39℃,反应10‑30 h。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述L‑谷氨酸变位酶的制备方法是:将核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的编码L‑谷氨酸变位酶的基因连接到质粒pET‑28a上,获得重组质粒pET‑28a‑GlmES,将该重组质粒装入大肠杆菌BL21,获得重组大肠杆菌BL21/pET‑28a‑GlmES,以重组大肠杆菌BL21/pET‑28a‑GlmES发酵生产得到L‑谷氨酸变位酶。

7.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的制备方法是:将核苷酸序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8或SEQ ID NO.9所示的编码L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的基因连接到质粒pET‑28a,获得重组质粒,将该重组质粒转入大肠杆菌BL21,获得重组大肠杆菌,以重组大肠杆菌发酵生产得到L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶。

8.如权利要求6或7所述的方法,其特征在于,L‑谷氨酸变位酶、L‑天冬氨酸‑β‑脱羧酶的制备方法还包括:收集培养得到的菌体,进行破碎,分离纯化目的酶蛋白,获得电泳纯的酶。