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专利号: 2020100178832
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 农业;林业;畜牧业;狩猎;诱捕;捕鱼
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.分室培养连续扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法,其特征在于:a.制备培养室:用隔离板(2)将培养盆体(1)等分为若干个隔离室,隔离板(2)高度与培养盆体(1)深度一致,在每个隔离板(2)上部分别开有矩形槽,在培养盆体(1)底端开有若干个排水孔(3),在隔离室底部填充具有良好吸水性、保水性及透气性的下层基质(4),在下层基质(4)上填充粒径较大,吸水性及保水性差的中层基质(5),在中层基质(5)上面分别铺设滤布(6),在滤布(6)上面分别填充蛭石与白沙体积比为1:1的混合基质(7)至装满培养盆体(1),下层基质(4)与中层基质(5)填充厚度分别为培养盆体(1)深度的五分之二和十分之一,构成培养室,培养室为圆柱形或矩形或其它形状,培养室下面放置托盘(8);

b.首先在其中任一个隔离室中播种宿主植物种子,待其长成幼苗后在根系附近接种从野外分离且鉴定的或人工扩繁的丛枝菌根真菌孢子,通过隔离室中的宿主植物进行丛枝菌根真菌孢子的连续扩繁,每间隔的天数为120与隔离室个数的比值,依照隔离室的排列顺序在相邻隔离室中相继播种宿主植物种子,使其长成幼苗但不接种丛枝菌根真菌孢子;

c.每间隔15天在托盘中浇注较高磷浓度的Hoagland营养液,每间隔30天,在上层基质中浇注较低磷浓度的Hoagland营养液,同时往上层基质和托盘中浇水,保持基质含水量在

50%~60%,以保证宿主植物和丛枝菌根真菌菌丝的生长;

d.120天后,对首次播种的隔离室中宿主植物进行遮光处理,使宿主植物死亡,每间隔的天数为120与隔离室个数的比值,按照原播种顺序依次对其它隔离室中的宿主植物进行遮光处理,使宿主植物死亡,任意一个隔离室中的宿主植物死亡后,移走这个隔离室中的上层基质,收集中层基质和下层基质,利用湿筛倾析法获取丛枝菌根真菌孢子;

e.取出任意一个隔离室中的基质后,保留上层基质重复利用,并依照上述步骤制备新的培养室,再次按原播种顺序进行播种接种宿主植物,经多次循环往复操作,获取所需用的丛枝菌根真菌孢子。

2.根据权利要求1所述的分室培养连续扩繁丛枝菌根真菌孢子的方法,其特征在于:a.制备培养室:选用圆形培养盆体(1),用两块十字交叉的隔离板(2)将培养盆体(1)等分为四个隔离室,隔离板(2)高度与培养盆体(1)深度一致,在每个隔离板(2)上部分别开有矩形槽,用玻璃胶将隔离板(2)与培养盆体(1)之间的缝隙密封,在培养盆体(1)底端开有四个排水孔(3),在隔离室底部填充的下层基质(4)为直径2mm的白沙,在白沙上填充的中层基质(5)为直径4mm的玻璃珠,在玻璃珠上铺设45μm的滤布”(6),滤布(6)紧贴隔离板(2)上的矩形槽,在滤布(6)上面分别填充蛭石与白沙体积比为1:1的混合基质(7)至装满培养盆体(1),白沙与玻璃珠填充厚度分别为培养盆体(1)深度的五分之二和十分之一,形成培养室,培养室下面放置托盘(8);

b.首先在其中任一个隔离室中播种宿主植物种子,待其长成幼苗后在根系附近接种从野外分离且鉴定的丛枝菌根真菌孢子,通过隔离室中的宿主植物进行丛枝菌根真菌孢子的连续扩繁,每间隔30天,按顺时针方向在相邻的隔离室中相继播种宿主植物种子,使其长成幼苗但不接种丛枝菌根真菌孢子;

‑1

c.每间隔15天在托盘中浇注磷浓度为200μM·L 的Hoagland营养液,每间隔30天在混‑1

合基质中浇注磷浓度为1μM·L 的Hoagland营养液,同时往混合基质和托盘中浇水,保持基质含水量在50%~60%;

d.120天后,对首次播种的隔离室中宿主植物进行遮光处理,使宿主植物死亡,每间隔

30天,按照隔离室中播种顺序依次对其他三个隔离室中的宿主植物进行遮光处理,使宿主植物死亡,任意一个隔离室中的宿主植物死亡后,移走这个隔离室中的混合基质,收集玻璃珠和白沙,利用湿筛倾析法获得丛枝菌根真菌孢子;

e.取出任意一个隔离室中的基质后,保留混合基质重复利用,并依照上述步骤制备新的培养室,再次按原播种顺序进行播种接种宿主植物,经多次循环往复操作,获取所需用的丛枝菌根真菌孢子。