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专利号: 2019113944729
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)ZJPH1903,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期为2019年10月14日,保藏编号:CCTCC NO:M 2019821,保藏地址:中国,武汉,武汉大学,邮编430072。

2.一种权利要求1所述阴沟肠杆菌ZJPH1903在催化2,2',4'-三氯苯乙酮不对称还原制备(R)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇中的应用。

3.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述的应用为:以2,2',4'-三氯苯乙酮为底物,以阴沟肠杆菌ZJPH1903经发酵培养获得的湿菌体为酶源,以蒸馏水或pH为6.0~8.0的缓冲液为反应介质构成转化体系,在30℃、200rpm条件下进行反应,反应结束后,将反应液离心,取上清液,得到含产物(R)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇的转化液。

4.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述底物的初始加入量以反应介质体积计为2~6g/L,湿菌体的用量以菌体湿重计为50~300g/L反应介质。

5.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述转化体系中还添加有辅助底物,所述辅助底物为下列之一:葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、甘油、甲醇、乙醇、异丙醇、半胱氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述辅助底物加入量以反应介质体积计为50~300g/L。

7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述转化体系由酶源、底物、辅助底物和表面活性剂组成,所述表面活性剂为吐温-80,吐温-20,十二烷基硫酸钠,优选吐温-80。

8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述表面活性剂的添加量以反应介质体积计为2~20g/L。

9.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述阴沟肠杆菌ZJPH1903在制备(R)-2-氯-1-(2,4-二氯苯基)乙醇中的应用按如下步骤进行:以2,2',4'-三氯苯乙酮为底物,葡萄糖为辅助底物,以吐温-80为表面活性剂,以阴沟肠杆菌ZJPH1903经发酵培养获得的湿菌体为酶源,于pH为6.5的磷酸缓冲液中构成转化体系,在30℃、200rpm条件下反应24h,反应结束后,获得含有目标产物的转化液;所述底物的初始加入量以缓冲液体积计为5~15g/L缓冲液,辅助底物加入量以缓冲液体积计为150g/L缓冲液,湿菌体的用量以菌体湿重计为200g/L缓冲液,表面活性剂的添加量以缓冲液体积计为6g/L。

10.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述酶源制备方法:

(1)斜面培养:将阴沟肠杆菌ZJPH1903接种至斜面培养基,25~30℃培养36h,获得斜面菌种;斜面培养基终浓度组成为:葡萄糖15g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L,(NH4)2SO4 2g/L,KH2PO4 2g/L,NaCl 1g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,琼脂粉15~20g/L,溶剂为水,pH值6.5;

(2)种子培养:将斜面菌种接种至种子培养基中,25~30℃、150~250rpm培养10~24h,获得种子液;种子培养基终浓度组成为:葡萄糖15g/L,蛋白胨20g/L,酵母膏10g/L,(NH4)

2SO4 2g/L,KH2PO4 2g/L,NaCl 1g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,溶剂为水,pH值6.5;

(3)发酵培养:将种子液以体积浓度为4~10%的接种量接种至发酵培养基中,装液量为80mL/250mL摇瓶,25~30℃、150~250rpm培养12~32h,发酵结束后,将发酵液离心,所得沉淀用0.1M、pH 6.5磷酸缓冲液洗涤,收集湿菌体,即为酶源;发酵培养基终浓度组成为:蔗糖30g/L,酵母膏41.43g/L,KH2PO4 2.53g/L,MgSO4·7H2O 0.5g/L,溶剂为水,pH 7.5。