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专利号: 2019113660750
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种与稻瘟病抗性相关的miRNA,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.编码权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA的基因,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA相应的前体,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

4.编码权利要求3所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA相应的前体的基因,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

5.权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA和/或其相应的前体在提高水稻对稻瘟病抗性中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:利用基因工程技术,通过抑制所述的miRNA在水稻中的表达,从而提高水稻对稻瘟病的抗性。

7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:所述的基因工程技术为CRISPR/Cas9技术。

8.一种利用CRISPR/Cas9技术培育抗稻瘟病水稻的方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)根据权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA和其相应的前体的序列设计两个靶点,根据靶点序列分别合成接头引物U3和U6a;

(2)将引物U3和U6a的正反向接头引物退火形成双链,然后分别连接到Bsa I酶切后的pYL-U3-gRNA、pYL-U6a-gRNA质粒片段上,并分别利用引物B1’/B2、B2’/BL进行扩增;

(3)将扩增产物用Bsa I酶切,将酶切片段纯化后连接到Bsa I酶切后的pYLCRISPR/Cas9-MT(I)载体上,即构建成靶向所述的miRNA的敲除载体;

(4)将步骤(3)得到的敲除载体转化水稻愈伤组织,经诱导获得再生苗,筛选得到阳性植株。

9.根据权利要求8所述的利用CRISPR/Cas9技术培育抗稻瘟病水稻的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的引物U3的正向接头引物、反向接头引物序列分别如SEQ ID NO:22~SEQ ID NO:23所示;

步骤(1)中所述的引物U6a的正向接头引物、反向接头引物序列分别如SEQ ID NO:24~SEQ ID NO:25所示;

步骤(2)中所述的引物B1’/B2、B2’/BL序列分别如SEQ ID NO:26~SEQ ID NO:29所示。