1.一种与稻瘟病抗性相关的miRNA,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.编码权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA的基因,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA相应的前体,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
4.编码权利要求3所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA相应的前体的基因,其特征在于:其核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
5.权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA和/或其相应的前体在提高水稻对稻瘟病抗性中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:利用基因工程技术,通过抑制所述的miRNA在水稻中的表达,从而提高水稻对稻瘟病的抗性。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于:所述的基因工程技术为CRISPR/Cas9技术。
8.一种利用CRISPR/Cas9技术培育抗稻瘟病水稻的方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)根据权利要求1所述的与稻瘟病抗性相关的miRNA和其相应的前体的序列设计两个靶点,根据靶点序列分别合成接头引物U3和U6a;
(2)将引物U3和U6a的正反向接头引物退火形成双链,然后分别连接到Bsa I酶切后的pYL-U3-gRNA、pYL-U6a-gRNA质粒片段上,并分别利用引物B1’/B2、B2’/BL进行扩增;
(3)将扩增产物用Bsa I酶切,将酶切片段纯化后连接到Bsa I酶切后的pYLCRISPR/Cas9-MT(I)载体上,即构建成靶向所述的miRNA的敲除载体;
(4)将步骤(3)得到的敲除载体转化水稻愈伤组织,经诱导获得再生苗,筛选得到阳性植株。
9.根据权利要求8所述的利用CRISPR/Cas9技术培育抗稻瘟病水稻的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的引物U3的正向接头引物、反向接头引物序列分别如SEQ ID NO:22~SEQ ID NO:23所示;
步骤(1)中所述的引物U6a的正向接头引物、反向接头引物序列分别如SEQ ID NO:24~SEQ ID NO:25所示;
步骤(2)中所述的引物B1’/B2、B2’/BL序列分别如SEQ ID NO:26~SEQ ID NO:29所示。