1.一种纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶的方法,其特征在于,以纳米酶标记抗原代替天然酶标记抗原,以分子印迹聚合物代替生物抗体;其中:所述纳米酶标记抗原由如下方法制备而成:
将Au@SiO2纳米材料和戊二醛混合后在避光条件下反应0.5~1.5h;再加入抗原溶液,继续避光反应0.5~1.5h,反应结束后,离心,将反应物进行分离洗涤,制备得到纳米酶标记抗原;
所述分子印迹聚合物膜由如下方法制备而成:
将抗原溶于乙腈和二甲基亚砜混合溶液中,再加入甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二异丁腈,搅拌均匀,得到混合溶液;将混合溶液加入到酶标板中,在氮气环境下,水浴反应14~18h,反应结束后用甲醇-醋酸溶液超声除去模板分子,洗涤至中性,干燥,直接在酶标板上制备得到分子印迹聚合物。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述Au@SiO2纳米材料由如下方法制备而成:将CTAB与HAuCl4混匀,用去离子水稀释后,在快速搅拌下加入冰水制备的NaBH4溶液,搅拌均匀,静置,得到金种子溶液;
将金种子溶液加入到生长液中,25~37℃环境下反应10~18h,制备得到纳米金棒;
将纳米金棒用去离子水配制成溶液,调节pH至9~11,然后分次加入硅酸四乙酯/乙醇溶液,30℃水浴24h,制备得到表面包覆二氧化硅的纳米金棒;
将表面包覆二氧化硅的纳米金棒依次用乙醇、乙酸乙酯离心,最后分散于甲苯中,加入APTES,在30℃超声2h,反应结束后依次用乙酸乙酯、乙醇逐步离心洗涤,制备得到Au@SiO2纳米材料。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述生长液由0.1M的CTAB、0.024M的HAuCl4、0.5M的H2SO4、10mM的AgNO4和0.1mM的左旋抗坏血酸溶液按体积比100mL:(2-2.1)mL:2mL:1mL:800μL组成。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述硅酸四乙酯/乙醇溶液中,硅酸四乙酯和乙醇的体积比为1:4。
5.根据权利要求2或4所述的方法,其特征在于,所述硅酸四乙酯/乙醇溶液分三次加入,三次总计加入的硅酸四乙酯/乙醇溶液与纳米金棒溶液的体积比为3:1000。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述纳米酶标记仿生免疫分析检测磺胺嘧啶,具体包括以下步骤:(1)将带有分子印迹聚合物膜的酶标板的第1行设为空白组,每孔只加入200μL的甲醇;
第2行设置为对照组,每孔加入100μL的纳米酶标记抗原溶液和100μL的甲醇;第3-8行每孔加入磺胺嘧啶标样梯度稀释液和100μL的纳米酶标记抗原溶液;室温竞争反应1h,加入TMB底物溶液进行显色反应,用酶标仪在450nm处读取紫外吸收值,计算抑制率;以磺胺嘧啶标样浓度对数值为横坐标,抑制率为纵坐标,绘制工作曲线;
(2)利用步骤(1)绘制的工作曲线对经前处理的待测物中的磺胺嘧啶的含量进行检测。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述磺胺嘧啶标样梯度稀释液由甲醇配成而成,其梯度浓度分别为:0.0512mg/L、0.256mg/L、1.28mg/L、6.4mg/L、32mg/L和160mg/L。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述抑制率的计算公式为:%CR=(1-A/Ao)×100
其中,A表示标准液或样液的平均吸光度;Ao表示对照孔的平均吸光度。
9.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述待测物的前处理方法为:将待测物用乙酸乙酯涡旋离心重复提取2~4次,合并提取液并在40℃下旋转蒸发,残余物用甲醇溶解,0.22μm滤膜过滤。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述待测物与乙酸乙酯加入量的比为1g:(3~5)mL。