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专利号: 2020105659078
申请人: 山东农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 测量;测试
更新日期:2025-12-19
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种纳米酶标记直接竞争仿生免疫分析检测组胺的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)采用Pt@SiO2纳米材料标记抗原,以PAF-45为支持载体的分子印迹聚合物作为仿生抗体,将Pt@SiO2纳米材料标记抗原、仿生抗体和系列浓度梯度的组胺标样溶液混合,室温竞争反应30-50min,取上清液,加入TMB底物溶液进行显色反应,用酶标仪在450nm波长下读取紫外吸收值,计算抑制率;以组胺标样溶液浓度对数值为横坐标,抑制率为纵坐标,绘制标准曲线;

(2)利用步骤(1)绘制的工作曲线对经前处理的待测物中的组胺含量进行检测。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述Pt@SiO2纳米材料标记抗原具体如下:将Pt@SiO2材料和戊二醛混合0.5~1h;加入组胺溶液,继续反应3~5h,反应结束后,离心分离,洗涤,得到Pt@SiO2纳米材料标记抗原。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述以PAF-45为支持载体的分子印迹聚合物由如下方法制备而成:将模板分子组胺二盐酸盐溶于二甲基亚砜中,加入甲基丙烯酸,进行预聚合反应,再加入PAF-45材料、二甲基丙烯酸乙二醇酯和偶氮二异丁腈,搅拌均匀,得到混合溶液;超声脱气,在氮气环境下,水浴反应14~18h,反应结束后用甲醇-冰乙酸溶液索氏提取除去模板分子,得到分子印迹聚合物。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述模板分子组胺二盐酸盐、甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯和PAF-45材料加入的质量比为1:1.4:3.23:0.43~1.00。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,预聚合反应的时间是30min。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述组胺标样溶液由乙醇配成而成,其梯度浓度分别为:0.1mg/L、0.5mg/L、2.5mg/L、12.5mg/L、60mg/L和300mg/L。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述前处理具体为:

向待测物中加入三氯乙酸溶液涡旋离心,重复提取2-4次,合并提取液,加入NaCl饱和后,用NaOH调节pH至12,用等比例的正丁醇-氯仿进行萃取,合并萃取液,40℃下氮气吹干,用5mL乙醇溶解残余物,0.22μm滤膜过滤;

所述待测物与三氯乙酸溶液加入量的比为5g:(10-20)mL。