1.一种分离纯化融合蛋白GLEGB的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:融合蛋白GLEGB的诱导表达:将类弹性蛋白ELP氨基酸序列、GB多肽用连接肽linker连接至葡萄糖苷酶Glu,构建重组质粒pET-GLEGB,将重组质粒转化到宿主细胞中以表达融合蛋白;
ATPF对融合蛋白GLEGB的分离纯化:将含有融合蛋白的菌液、表面活性剂和(NH4)2SO4混合作为下相,上相为PEG2000,进行浮选,分别收集浮选后的上下相溶液,记录体积,并测定浮选后上相和下相中的酶活和蛋白含量;
ATPF结合ITC对融合蛋白GLEGB的分离纯化:在收集的上相混合液中添加硫酸铵,水浴加热,离心去上清;之后用Tris-HCl缓冲液重悬沉淀,并在低温下孵育一定时间,离心去杂质,得到纯化的目标酶溶液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述下相中(NH4)2SO4的浓度为0.25g/mL-
0.45g/mL;表面活性剂的浓度为1.0-2.0%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的表面活性剂是BS-12。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述下相与上相的体积比为5:1;其中下相中含有融合蛋白的菌液用量占下相总体积的1/5。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述上相中PEG2000的浓度为30-50%。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述浮选条件为在流速为20-40mL/min条件下浮选20-40min。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述硫酸铵加入到上相酶液中,使硫酸铵的终浓度为0.1-1M。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述水浴加热时间为10min,温度15-37℃。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述重悬后的溶液孵育条件:4℃,10-
40min。