1.一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于,制备方法包括如下步骤:(1)构建裂解质粒pJSL20;
(2)构建Ara和IPTG双控诱导外膜蛋白及裂解E蛋白表达质粒pJSL24;
(3)将pJSL24转入副溶血弧菌SD菌株中,得到rVP;
(4)rVP表达外膜蛋白后进行裂解以制备rVPG。
2.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于:所述步骤(2)中同一质粒上转录调控的方式为:IPTG控制副溶血弧菌外膜蛋白基因转录以及Ara控制裂解E基因的转录。
3.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于:所述步骤(3)中转入方式为三亲结合转移。
4.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于:所述步骤(4)中反应条件为OD600=0.3时,同时加入0.5 mM IPTG及0.1%Ara分别诱导外膜蛋白及裂解E蛋白的表达,裂解时间为9 h。
5.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于,所述步骤(2)具体为:
1)构建双终止子裂解质粒pJSL23;
2)构建IPTG诱导VP1667蛋白表达质粒pJSL21;
3)以pMal-c2x为模板进行扩增得到Ptac-L片段;
4)以副溶血弧菌SD菌株基因组为模板扩增VP2369片段;
5)将Ptac-L和VP2369片段通过Overlapping PCR的方式连接成片段Ptac-VP2369;
6)以pJSL21为模板进行扩增得到LacI-Ptac-VP1667片段;
7)将LacI-Ptac-VP1667与Ptac-VP2369片段通过Overlapping PCR的方式连接成片段LacI-Ptac-VP1667-Ptac-VP2369片段;
8)LacI-Ptac-VP1667-Ptac-VP2369片段与载体pJSL23用NotI内切酶进行酶切,将酶切片段与载体片段进行酶连,酶连产物纯化后热转化至大肠杆菌DH5α中以构建Ara和IPTG双控诱导外膜蛋白及裂解E蛋白表达质粒pJSL24。
6.一种利用权利要求1-5所述的展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影在制备预防副溶血弧菌感染疫苗中的应用。