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专利号: 2019106971191
申请人: 浙江农林大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于,制备方法包括如下步骤:(1)构建裂解质粒pJSL20;

(2)构建Ara和IPTG双控诱导外膜蛋白及裂解E蛋白表达质粒pJSL24;

(3)将pJSL24转入副溶血弧菌SD菌株中,得到rVP;

(4)rVP表达外膜蛋白后进行裂解以制备rVPG。

2.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于:所述步骤(2)中同一质粒上转录调控的方式为:IPTG控制副溶血弧菌外膜蛋白基因转录以及Ara控制裂解E基因的转录。

3.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于:所述步骤(3)中转入方式为三亲结合转移。

4.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于:所述步骤(4)中反应条件为OD600=0.3时,同时加入0.5 mM IPTG及0.1%Ara分别诱导外膜蛋白及裂解E蛋白的表达,裂解时间为9 h。

5.根据权利要求1所述的一种展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影,其特征在于,所述步骤(2)具体为:

1)构建双终止子裂解质粒pJSL23;

2)构建IPTG诱导VP1667蛋白表达质粒pJSL21;

3)以pMal-c2x为模板进行扩增得到Ptac-L片段;

4)以副溶血弧菌SD菌株基因组为模板扩增VP2369片段;

5)将Ptac-L和VP2369片段通过Overlapping PCR的方式连接成片段Ptac-VP2369;

6)以pJSL21为模板进行扩增得到LacI-Ptac-VP1667片段;

7)将LacI-Ptac-VP1667与Ptac-VP2369片段通过Overlapping PCR的方式连接成片段LacI-Ptac-VP1667-Ptac-VP2369片段;

8)LacI-Ptac-VP1667-Ptac-VP2369片段与载体pJSL23用NotI内切酶进行酶切,将酶切片段与载体片段进行酶连,酶连产物纯化后热转化至大肠杆菌DH5α中以构建Ara和IPTG双控诱导外膜蛋白及裂解E蛋白表达质粒pJSL24。

6.一种利用权利要求1-5所述的展示副溶血弧菌VP1667及VP2369蛋白的副溶血弧菌菌影在制备预防副溶血弧菌感染疫苗中的应用。