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专利号: 2019106900938
申请人: 华南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记,其特征在于,其序列如SEQ ID NO.1所示。

2.用于扩增权利要求1所述用于检测F亚群禽白血病病毒的分子标记的引物,其特征在于,所述引物的核苷酸序列为:F1 : 5'‑CCTACAACTGACCCTACGGC‑3',

R1 : 5'‑TTAGACCATGGGGCTATCAGGA‑3。

3.一种用于检测F亚群禽白血病病毒的试剂盒,其特征在于,包含权利要求2所述的引物和实时荧光定量PCR所需的试剂。

4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述的实时荧光定量PCR所需的试剂包括2×iTaq Universal SYBR Green Supermix。

5.权利要求3或4所述的用于检测F亚群禽白血病病毒的试剂盒的非诊断和治疗目的的应用,包括如下步骤:以待测样品总DNA为模板,以权利要求3或4所述试剂盒中的引物进行实时荧光定量PCR,根据扩增曲线判定结果。

6.根据权利要求5所述试剂盒的非诊断和治疗目的的应用,其特征在于,还包括如下步骤:设立NTC对照和POS对照;两种对照对于结果判读起决定性作用:有效扩增:NTC检测结果为阴性并且POS检测结果为阳性;无效扩增:NTC检测结果为阳性并且POS检测结果为阳性提示体系污染;无效扩增:NTC检测结果为阴性并且POS检测结果为阴性提示体系错误或者试剂失效;只有对照有效扩增情况下的样品检测结果才可信,否则试验需要重复。

7.根据权利要求5所述试剂盒的非诊断和治疗目的的应用,其特征在于,所述的实时荧光定量PCR的反应条件为:95℃预变性3 min;95℃ 15s、55℃ 30s,40个循环,每个循环55℃时收集荧光。

8.根据权利要求5所述试剂盒的非诊断和治疗目的的应用,其特征在于,所述的实时荧光定量PCR的体系为:每10μL反应体系含:浓度为10μM的上游引物0.5μL,浓度为10μM的下游引物0.5μL,2×iTaq Universal SYBR Green Supermix 5μL,cDNA模板1μL,无核酸酶水3μL。

9.根据权利要求6所述试剂盒的非诊断和治疗目的的应用,其特征在于,所述判定结果的具体方法如下:在对照有效扩增的情况下,样品检测结果可信,否则试验需要重复;在检测中两种对照为有效扩增时,样本结果判断标准如下:Ct值小于34.5的标本为阳性结果;Ct值大于等于34.5的标本为阴性结果。