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专利号: 2019106767024
申请人: 沈阳农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种蜡样芽孢杆菌肠毒素基因的CAMP检测引物组,其特征在于,所述引物组包括两组引物,分别为针对蜡样芽孢杆菌肠毒素基因entFM区片段扩增的引物和针对蜡样芽孢杆菌肠毒素基因bceT区片段扩增的引物;

所述针对蜡样芽孢杆菌肠毒素基因entFM区片段扩增的引物,其顺向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,逆向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;

所述针对蜡样芽孢杆菌肠毒素基因bceT区片段扩增的引物,其顺向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,逆向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.一种试剂盒,包括如权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌肠毒素基因的CAMP检测引物组,其特征在于,包括若干个装有CAMP工作液的CAMP反应管,每个所述CAMP反应管中含有所述引物组中的一组引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述的CAMP工作液为引物与DEPC处理水混合而成,每条引物在所述CAMP工作液中的浓度均为1.5~2.0μM。

4.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,还包括CAMP反应液和CAMP显色液。

5.根据权利要求4所述试剂盒,其特征在于,所述的CAMP反应液包括Bst聚合酶、dNTPs、CAMP反应缓冲液和DEPC处理水。

6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述的CAMP反应缓冲液包括Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4和Triton X-100。

7.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述的CAMP显色液包括Sybr Green I,Eva Green,羟基萘酚蓝和铬黑T中的至少一种。

8.一种蜡样芽孢杆菌肠毒素基因的CAMP检测方法,使用如权利要求2-7任一项所述的试剂盒,其特征在于,包括以下步骤:

1)将核酸样本、CAMP反应液、DEPC处理水加入CAMP反应管,得到扩增反应液;

2)将步骤1)中获得的扩增反应液61~65℃反应20~60min,根据显色结果判断是否是蜡样芽孢杆菌,以及判断其是否含有肠毒素基因entFM和/或bceT。

9.根据权利要求8所述的蜡样芽孢杆菌肠毒素基因的CAMP检测方法,其特征在于,步骤

2)的工作条件为,扩增反应液64℃反应60min。

10.权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌肠毒素基因的CAMP检测引物组、权利要求2-7任一项所述的试剂盒在蜡样芽孢杆菌肠毒素基因entFM和bceT检测中的应用。