1.一种重组脂肪酶突变体,由序列如SEQ ID NO:2所示的氨基酸经定点突变而来,所述突变的位点为下列中的一个或多个:(1)第145位、(2)第194位。
2.如权利要求1所述的重组脂肪酶突变体,其特征在于所述重组脂肪酶突变体由序列如SEQ ID NO:2所示的氨基酸经下列之一或多个位点突变而得:(1)第145位的亮氨酸突变为天冬氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸;(2)第194位的异亮氨酸突变为赖氨酸。
3.如权利要求1所述的重组脂肪酶突变体,其特征在于所述重组脂肪酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
4.编码权利要求1所述的重组脂肪酶突变体的基因。
5.如权利要求4所述的编码基因,其特征在于所述编码基因核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
6.由权利要求5所述编码基因构建的重组载体。
7.由权利要求6所述重组载体转化得到的重组基因工程菌。
8.权利要求1~3之一所述的重组脂肪酶突变体在制备莫西沙星药物中间体(2S,3R)-N-乙酰-哌啶-2,3-二甲酸二甲酯中的应用。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于所述应用为:将整合有重组脂肪酶突变体编码基因的基因工程菌经发酵培养后的发酵液离心,以发酵上清或分离纯化后的酶作为催化剂,以外消旋的N-乙酰-哌啶-2,3-二甲酸二甲酯为底物,以pH值为3.0~10.0的100mM磷酸盐的缓冲液为反应介质构成反应体系,在25~50℃转化反应,反应结束后,获得(2S,3R)-N-乙酰-哌啶-2,3-二甲酸二甲酯的反应液。
10.如权利要求9所述的应用,其特征在于所述底物初始浓度为1~2mol/L反应体系,所述酶的用量为0.1~0.8g/L反应体系。