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专利号: 2019104611308
申请人: 长春理工大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-28
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株铜绿假单胞菌,其为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO:M 2018927。

2.如权利要求1所述的铜绿假单胞菌在合成聚羟基脂肪酸酯上的应用。

3.根据权利要求2所述的铜绿假单胞菌在合成聚羟基脂肪酸酯上的应用,其特征在于铜绿假单胞菌合成聚羟基脂肪酸酯的方法为:一、将上述的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1活化得到菌液,然后将菌液按照5%的体积比接种到含有质量百分数为1%~4%碳源的MS培养基中,在35~38℃、

160~200rpm条件下振荡培养70~75h,得到发酵液;其中碳源为豆油或废弃食用油;

二、步骤一中的发酵液在5000rpm/min条件下离心20min,弃上清液留沉淀,将沉淀进行干燥;

三、按照重量百分比为1~3%的比例向步骤三中的干燥物中加入氯仿,超声波破碎8~

12min后,于28~32℃摇床上震荡提取45~50h,抽滤、旋转蒸发去除氯仿;

四、向步骤三中的剩余物中加入甲醇溶液,摇匀混合液静置析出白色絮状固体,过滤、冻干后即得到聚羟基脂肪酸酯;其中甲醇与剩余物的重量比为4~6:1。

4.根据权利要求3所述的铜绿假单胞菌在合成聚羟基脂肪酸酯上的应用,其特征在于步骤一中活化的方法为:将铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa 93-3-1接种到5mL LB液体培养基中,在35~38℃、160~200rpm条件下振荡培养12~16h,即完成了活化。

5.根据权利要求3所述的铜绿假单胞菌在合成聚羟基脂肪酸酯上的应用,其特征在于步骤一中在37℃、180rpm条件下振荡培养72h。

6.根据权利要求3所述的铜绿假单胞菌在合成聚羟基脂肪酸酯上的应用,其特征在于步骤三中于30℃摇床上震荡提取48h。

7.根据权利要求3所述的铜绿假单胞菌在合成聚羟基脂肪酸酯上的应用,其特征在于步骤四中甲醇与剩余物的重量比为5:1。

8.用权利要求1所述的铜绿假单胞菌合成的聚羟基脂肪酸酯制备GC-MS样品的方法,其特征在于制备GC-MS样品的方法按照以下步骤进行:一、50mg权利要求2得到的聚羟基脂肪酸酯和2mL到浓度为15%硫酸甲醇溶液中混合均匀,再加入2mL氯仿溶液混合,在100℃条件下加热3h,然后冷却至室温,即得到第一次混合液;

二、第一次混合液与1mL去离子水混合,振荡混匀后静置分层,然后取下层氯仿相,过滤后与无水硫酸镁混合充分除水后静置得到第二次混合液;

三、向第二次混合液中加入500μL的0.1%氯仿标准品溶液混合均匀,即得到GC-MS样品;其中标准品为正辛酸乙酯。