1.一种BPDE加合基因的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)镜下观察培养基中细胞融合度长到70%‑80%，此时细胞状态良好；

2)在培养基中加入甲醛，使细胞在甲醛中固定，涡旋培养皿使甲醛在培养基中混匀，室温下静置10min；

3)在每个培养皿中加入10×Glycine，旋转混匀，在室温下孵育5min，淬灭未反应的甲醛；

4)弃去培养基后在培养皿中加入在0‑4℃下预冷的PBS缓冲液，洗涤细胞，重复漂洗两次，每次均小心抽吸，除去尽可能多的PBS缓冲液，不得打乱细胞；

5)在每个培养皿中加入含1×PICⅡ的0‑4℃下预冷的PBS缓冲液，使用无菌细胞刮棒从每个培养皿中收集细胞，收集到离心管中；

6)在4℃下按800×g离心5min，使细胞沉淀，小心移除上清；

7)使细胞再悬浮于含1×PICⅡ的细胞裂解缓冲液中，在冰上孵育15min，孵育过程中每

5min涡旋混匀一次；

8)在4℃下按800×g离心5min，去除上清，重悬细胞沉淀于含1×PICⅡ的细胞裂解缓冲液中，获得裂解产物；

9)将裂解产物两等分置于EP管中，其中一份加入BPDE的DMSO溶液作为实验组，另外一份加入等体积的DMSO溶液作为对照组，37℃孵育过夜；

10)使用超声破碎仪进行超声处理；

11)在4℃下按12000×g离心10min，除去不溶性物质，将实验组和对照组的剪切染色质分别移至新的EP管中；

12)剪切染色质中分别加入含1×PICⅡ的ChIP稀释缓冲液，从实验组和对照组中分别取2vol%上清液作为input，在4℃下保存；

13)在余下的实验组和对照组中均加入Anti‑BPDE Monoclonal Antibody，在4℃下恒温摇床孵育过夜；

14)混匀ChIP‑Grade Protein A/G磁珠，使磁珠完全悬浮，加入至实验组、对照组和两份input中，封口膜封闭，在4℃下孵育2h；

15)将实验组、对照组和两份input的EP管置于磁性分离架上，ChIP‑Grade Protein A/G磁珠吸附至管壁，静置3min，移除上清；

16)按以下列出的顺序，分别将磁珠悬浮于每种在0‑4℃下预冷的缓冲液，并分别在4℃的恒温摇床上孵育5min，然后分别进行磁分离，移除上清，洗涤Grade Protein A/G磁珠‑染色质复合物：a.低盐洗涤缓冲液，洗涤一次；

b.高盐洗涤缓冲液，洗涤一次；

c.LiCl洗涤缓冲液，洗涤一次；

d.TE缓冲液，洗涤一次；

17)在实验组、对照组和两份input的EP管中分别加入ChIP Elution Buffer；

18)实验组、对照组和两份input的EP管在62℃水浴震荡孵育2h，95℃培养10min，实验组和对照组的染色质从ChIP‑Grade Protein A/G磁珠上洗脱下来，冷却至室温；

19)实验组和对照组的EP管置于磁性分离架，静置3min，ChIP‑Grade Protein A/G磁珠吸附至管壁，将上清液转移至新的EP管中，分别标记；

20)在实验组、对照组和两份input的EP管中分别加入DNA Binding Buffer，涡旋混匀；

21)转移至带接收管的离心过滤器中，12000×g离心30s，从接收管中取出离心过滤器，保留接收管，弃去液体，离心过滤器放回到同一接收管中；

22)加入Wash Buffer，12000×g离心30s，从接收管中取出离心过滤器，保留接收管，弃去液体，离心过滤器放回到同一接收管中；12000×g再次离心30s，弃去接收管和液体；

23)放入新的接收管，把DNA Elution Buffer直接加到白色离心过滤器膜的中心，

12000×g离心30s，取出并弃去离心过滤器，此时的洗脱缓冲液为纯化DNA；

24)检测实验组、对照组和两份input的纯化DNA的浓度及纯度，进行高通量测序，若对照组未检出DNA浓度，实验组去除实验组对应的input本底值后所得的基因，即BPDE加合基因；若对照组检出DNA浓度，实验组去除对照组后所得的基因，即BPDE加合基因。

2.根据权利要求1所述的一种BPDE加合基因的鉴定方法，其特征在于，完成步骤9)后，分别取实验组和对照组的部分裂解产物进行DNA琼脂糖凝胶分析，完成步骤11)后，分别取实验组和对照组的剪切染色质进行DNA琼脂糖凝胶分析，于凝胶成像系统下观察条带，若条带宽度为100‑500bp，继续进行步骤12)。

3.根据权利要求1所述的一种BPDE加合基因的鉴定方法，其特征在于，完成步骤11）后，分别测定实验组和对照组的经超声处理的裂解产物的DNA浓度，若DNA浓度在50μg/mL以上，继续进行步骤12)。

4.根据权利要求1所述的一种BPDE加合基因的鉴定方法，其特征在于，在步骤11)中，除去不溶性物质后，将实验组和对照组的剪切染色质分别移至三个新的EP管中。

5.根据权利要求4所述的一种BPDE加合基因的鉴定方法，其特征在于，实验组的三个新的EP管分别为实验组试验管、实验组阴性对照管和实验组阳性对照管，对照组的三个新的EP管分别为对照组试验管、对照组阴性对照管和对照组阳性对照管；在步骤12)中，两份input分别取自实验组试验管和对照组试验管。

6.根据权利要求5所述的一种BPDE加合基因的鉴定方法，其特征在于，Anti‑BPDE Monoclonal Antibody分别加入至实验组试验管和对照组试验管中，实验组阴性对照管和对照组阴性对照管中分别加入Normal Mouse IgG，实验组阳性对照管和对照组阳性对照管分别加入Anti‑RNA polymerase Ⅱ Antibody，均在4℃下恒温摇床孵育过夜，然后均进行步骤14)至23)。

7.根据权利要求6所述的一种BPDE加合基因的鉴定方法，其特征在于，实验组阴性对照管、实验组阳性对照管、实验组对应的input、对照组阴性对照管、对照组阳性对照管以及对照组对应的input中的部分纯化DNA均进行PCR扩增，若在166bp处获得条带，则说明ChIP质控良好，继续进行步骤24)。