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专利号: 2019103124884
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种亨廷顿舞蹈症特征基因的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将待测样品与荧光素标记的RNA适配体溶液混匀;所述RNA含有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列;

(2)向步骤(1)的混合溶液中加入核糖核酸内切酶RNase H,孵育至少2min;

(3)向步骤(2)的酶切反应产物中加入氧化石墨烯,混匀、孵育,得到待检测溶液,在激发波长为480nm,检测波长520nm的条件下检测荧光强度。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述亨廷顿舞蹈症特征基因为(CAG)n,其中,n=6~15,且n为整数。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述亨廷顿舞蹈症特征基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述荧光素包括5-羧基荧光素。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述核糖核酸内切酶RNase H的用量为

3.75×105U/mol RNA;所述酶切反应在36~37℃反应50~60min。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述氧化石墨烯的用量为1.1~1.2×104g/mol RNA适配体。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,还建立不同浓度亨廷顿舞蹈症特征基因与荧光强度的标准曲线,根据该标准曲线,计算检测获得的荧光强度对应的DNA浓度。

8.一种用于亨廷顿舞蹈症特征基因检测的试剂盒,其特征在于,含有DNA试剂、氧化石墨烯、经荧光标记的RNA适配体、RNase H酶;所述经荧光标记的RNA适配体是5-羧基荧光素标记的RNA;所述RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述DNA试剂、氧化石墨烯分别溶解在DEPC水中。

9.根据权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述经荧光素标记的RNA是在RNA的5’端连接5-羧基荧光素。

10.权利要求1~7任一所述方法或权利要求8~9任一所述的试剂盒在生物、医学检测领域中的应用。