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专利号: 2019102136475
申请人: 广东海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2025-06-13
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,以大肠杆菌为出发菌株,将大肠杆菌的β-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ基因和脂肪酸降解抑制因子基因同时敲除,并转入硫酯酶基因表达载体和冰核蛋白基因表达载体,得到所述表达高活性冰核蛋白的基因工程菌。

2.根据权利要求1所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述大肠杆菌为E.coli MG1655、E.coli DH5α或E.coli BW25113中的任一种。

3.根据权利要求2所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述大肠杆菌为E.coli MG1655。

4.根据权利要求3所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述β-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述脂肪酸降解抑制因子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求4所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述硫酯酶基因为拟南芥硫酯酶基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求4所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述冰核蛋白基因为来自菠萝泛菌的冰核蛋白基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.根据权利要求1所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,通过P1噬菌体转导或Red重组技术敲除β-酮脂酰ACP合成酶Ⅰ基因和脂肪酸降解抑制因子基因。

8.根据权利要求5所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述硫酯酶表达载体的构建方法为将硫酯酶基因与质粒pBAD43连接。

9.根据权利要求6所述的表达高活性冰核蛋白的基因工程菌的构建方法,其特征在于,所述冰核蛋白基因表达载体的构建方法为将冰核蛋白基因与载体pQE30连接。

10.一种表达高活性冰核蛋白的基因工程菌,其特征在于,由权利要求1-9任一项所述的方法构建得到。