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专利号: 2019101748690
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种银杏内生真菌代谢产物,其特征在于所述代谢产物按如下方法制备:(1)将黄盖小脆柄菇(Psathyrella candolleana)Gb.PY-F1发酵液经超声破碎后抽滤,滤液经微孔滤膜过滤后用乙酸乙酯萃取,有机相浓缩至干,获得代谢粗产物;所述黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为:CCTCC M 2019125,保藏日期为2019年3月6日,地址为中国武汉武汉大学,邮编430072;(2)将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解后进行硅胶柱层析,以体积比100→0:0→100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,收集体积比0:

100石油醚-乙酸乙酯的流出液,浓缩至干,记为样品Gf.11;(3)将步骤(2)样品Gf.11用乙酸乙酯溶解后再次进行硅胶柱层析,以体积比60:1→0:1的氯甲烷-甲醇为流动相梯度洗脱,收集体积比5:1氯甲烷-甲醇的流出液,浓缩至干,记为组分Gf.11-8;(4)组分Gf.11-8以体积比1:1的二氯甲烷:甲醇为洗脱剂进行凝胶Sephadex LH-20柱分离,收集第1至第4个柱体积的流出液,浓缩至0.05倍体积,获得浓缩液;(5)将步骤(4)浓缩液用半制备液相分离,以体积比80:20的乙腈:水为流动相,流速为3mL/min,收集第3-4分钟所出的单峰,浓缩至干燥,得银杏内生真菌代谢产物。

2.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物,其特征在于步骤(1)发酵液制备方法为:

将黄盖小脆柄菇(Psathyrella candolleana)Gb.PY-F1接种于发酵培养基中,28℃,180r/min培养7d,获得发酵液;所述发酵培养基组成:硝酸钠3g/L,磷酸氢二钾1g/L,硫酸镁0.5g/L,氯化钾0.5g/L,硫酸亚铁0.01g/L,蔗糖30g/L,溶剂为蒸馏水,pH7.0~7.2。

3.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物,其特征在于步骤(1)代谢粗产物制备方法为:在405W条件下,每工作3s,间歇4s,进行300次循环对发酵液进超声破壁处理后抽滤,取滤液经0.45μm微孔滤膜过滤后浓缩至原体积的1/3,用乙酸乙酯萃取,有机相浓缩至恒重,获得黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1代谢粗产物。

4.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物,其特征在于步骤(2)按如下操作进行:将步骤(1)黄盖小脆柄菇Gb.PY-F1代谢粗产物用乙酸乙酯溶解,加入硅胶,研磨均匀后,真空干燥,即为吸附样品的硅胶;将吸附样品的硅胶上样于硅胶色谱柱中,装柱量3/4,采用体积比100→0:0→100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,收集体积比0:100石油醚-乙酸乙酯的流出液,浓缩至干,记为样品Gf.11。

5.如权利要求4所述银杏内生真菌代谢产物,其特征在于所述硅胶与代谢粗产物质量比为1.5:1。

6.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物,其特征在于步骤(2)石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱体积比依次为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:

90、0:100。

7.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物,其特征在于步骤(3)按如下操作进行将步骤(2)样品Gf.11用乙酸乙酯溶解,加入硅胶,研磨均匀后,真空干燥,即为吸附样品Gf.11的硅胶,将吸附样品Gf.11的硅胶上样于硅胶色谱柱中,装柱量3/4,以体积比60:1→0:1的氯甲烷-甲醇为流动相梯度洗脱,收集体积比5:1氯甲烷-甲醇的流出液,浓缩至干,记为组分Gf.11-8;所述硅胶与样品Gf.11质量比为1.5:1。

8.如权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物,其特征在于步骤(5)按如下操作进行:将步骤(4)浓缩液用半制备液相分离,采用ODS柱,以体积比80:20的乙腈:水为流动相,流速为

3mL/min,柱温25℃,进样量每次为0.5mL,收集第3-4分钟所出的单峰,浓缩至干燥,得银杏内生真菌代谢产物。

9.一种权利要求1所述银杏内生真菌代谢产物在制备抑菌剂中的应用。

10.如权利要求9所述的应用,其特征在于所述抑菌剂为金黄色葡萄球菌

(Staphylococcus aureus)抑菌剂。