1.一种分段补料发酵生产鲜味肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)菌种活化:制备鲜味肽生产菌株B.subtilis WB800/pMA09srfA-10SSRDEQSR,并将其接种至LB固体培养基上,在37℃条件下活化培养8 10h;菌株中的srfA为自诱导型启动~子,其基因序列如SEQ ID NO.1所示;
(2)摇瓶培养:取活化后的鲜味肽生产菌株接种至LB液体培养基中,在200rpm、37℃条件下培养至OD600=0.6,之后按0.05%~0.2%的接种量转入LB液体培养基中,在200rpm、37℃条件下摇瓶培养8h作为种子培养液备用;
(3)分段补料发酵:将种子培养液接种至基础发酵培养基中进行培养,当基础培养基中碳源浓度在5g/L以下时启动指数补料控制,进行指数流加补料,自诱导生产鲜味肽;指数流加的补料速度如(1)式所示:式中F表示补料流加速率;μ表示菌体比生长速率,并且μ分段,μ值分段包括4个阶段,时间从补料开始时计算,分别为0 4h、4 8h、8 14h、14 20h,各阶段的μ值分别为0.45 0.5、~ ~ ~ ~ ~
0.25~0.35、0.15~0.2、0~0.1;X0表示开始补料时发酵罐内的菌体浓度;V0表示开始补料时发酵罐内的培养基体积;SF表示补料培养基中的底物葡萄糖浓度;YX/S菌体生长基于底物的得率系数,t表示补料时间。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述鲜味肽包括氨基酸序列为Ser-Ser-Arg-Asp-Glu-Gln-Ser-Arg的多肽。