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专利号: 201910108476X
申请人: 常熟理工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株肠杆菌在制备2,3‑丁二醇的应用,其特征在于,该菌株命名为肠杆菌Kosakonia cowanii LT‑1,菌株已于2017年12月29日保藏在“中国典型培养物保藏中心”,保藏号为CCTCC No:M 2017850。

2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,包括如下步骤:(1)菌株活化:

(2)种子培养:

(3)发酵培养:将种子液接种到发酵培养基,发酵42 84 h,可得含有2,3‑丁二醇的发~

酵液;

所述发酵培养基包括如下组分:碳源80 140 g/L,氮源4 8 g/L,金属盐1 2.5 g/L, pH~ ~ ~

值7.0 7.2,余量为水;

~

所述碳源为甘油、葡萄糖、乳糖的任意一种或几种的组合;所述氮源为牛肉膏、胰蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、黄豆粉、小麦胚芽粉、花生饼粉、酵母粉中的任意一种或几种的组合;金属盐为硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸锰、氯化钙、硝酸钠中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,步骤(1)中,菌株活化的培养条件如下:将肠杆菌K. cowanii LT‑1接种到斜面培养基上,24 36 °C静置培养24 36 h,再次挑~ ~

取单菌落划线到种子培养基上,24 36 °C培养24 36 h,得到活化菌种备用;

~ ~

斜面培养基:蛋白胨20 g/L,酵母粉5 g/L,氯化钠 10 g/L,琼脂粉20 g/L,自来水配制,调整pH值至7.0 7.2,121 °C灭菌20 min;

~

固体种子培养基:碳源10 30 g/L,氮源4 8 g/L,金属盐1.0 2.5 g/L,琼脂粉20 g/L,~ ~ ~

余量为水,pH 7.0 7.2。

~

4.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,步骤(2)中,种子培养包括如下步骤:将活化菌种接种到液体种子培养基中,温度24 36 °C,震荡培养24 48 h,得到发酵种子液;

~ ~

液体种子培养基:碳源10 30 g/L,氮源4 8 g/L,金属盐1.0 2.5 g/L,余量为水,pH ~ ~ ~

7.0 7.2。

~

5.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,步骤(3)中,所述发酵的温度为28 38 °C。

~

6.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,步骤(3)中,发酵时,摇瓶接种量为摇瓶中培养基的体积分数的1 10%;发酵罐接种量为发酵罐中培养基的体积分数的1 30%;发酵罐~ ~

发酵方式为分批补料法。

7.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述2,3‑丁二醇的提取方法如下:取发酵液,离心除去菌体,进行减压蒸馏获得2,3‑丁二醇体积分数为30% 50%的浓缩液,然后加入~

与浓缩液等体积的K2HPO4‑乙醇溶液,所述K2HPO4‑乙醇溶液中K2HPO4质量分数为45%,形成双相体系,取上相中的溶液进行蒸馏,得到2,3‑丁二醇。

8.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,利用含有2,3‑丁二醇的发酵液提取2,3‑丁二醇的方法为盐析萃取法。