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专利号: 201910108476X
申请人: 常熟理工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-26
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一株肠杆菌,该菌株命名为肠杆菌Kosakonia cowanii LT-1,菌株已于2017年12月

29日保藏在“中国典型培养物保藏中心”,保藏号为CCTCC No:M 2017850。

2.权利要求1所述肠杆菌在制备2,3-丁二醇的应用。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,包括如下步骤:(1)菌株活化:

(2)种子培养:

(3)发酵培养:将步骤(2)中种子液接种到发酵培养基,发酵42~84h,可得含有2,3-丁二醇的发酵液;

所述发酵培养基包括如下组分:碳源80~140g/L,氮源4~8g/L,金属盐1~2.5g/L,pH值7.0~7.2,余量为水;

所述碳源为甘油、葡萄糖、乳糖的任意一种或几种的组合;所述氮源为牛肉膏、胰蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、黄豆粉、小麦胚芽粉、花生饼粉、酵母粉中的任意一种或几种的组合;金属盐为硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸锰、氯化钙、硝酸钠中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)中,菌株活化的培养条件如下:将肠杆菌K.cowanii LT-1接种到斜面培养基上,24~36℃静置培养24~36h,再次挑取单菌落划线到种子培养基上,24~36℃培养24~36h,得到活化菌种备用;

斜面培养基:蛋白胨20g/L,酵母粉5g/L,氯化钠10g/L,琼脂粉20g/L,自来水配制,调整pH值至7.0~7.2,121℃灭菌20min;

固体种子培养基:碳源10~30g/L,氮源4~8g/L,金属盐1.0~2.5g/L,琼脂粉20g/L,余量为水,pH 7.0~7.2。

5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)中,种子培养包括如下步骤:将活化菌种接种到液体种子培养基中,温度24~36℃,震荡培养24~48h,得到发酵种子液;

液体种子培养基:碳源10~30g/L,氮源4~8g/L,金属盐1.0~2.5g/L,余量为水,pH 

7.0~7.2。

6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(3)中,所述发酵的温度为28~38℃。

7.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(3)中,所述发酵,其特征在于摇瓶接种量为1~10%;发酵罐接种量为1~30%;发酵罐发酵方式为分批补料法。

8.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,所述2,3-丁二醇的提取方法如下:取发酵液,离心除去菌体,进行减压蒸馏获得2,3-丁二醇体积分数为30%~50%的浓缩液,然后加入与浓酸也等体积的K2HPO4质量分数为45%的K2HPO4/乙醇溶液,形成双相体系,取上相中的溶液进行蒸馏,得到2,3-丁二醇。

9.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,2,3-丁二醇的粗提取方法为盐析萃取法。