1.一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤：9

(1)将降解菌株制备成菌体细胞悬液，并稀释为10个/mL；再制备降解菌株和MC‑LR共存的储备液；

+

通过N离子束注入技术对降解菌株进行辐照，得到辐照后降解菌株A1、A2、A3，

13 + 2

A1：辐照剂量为40个单位，每个单位为2.6×10 N/cm，

13 + 2

A2：辐照剂量为60个单位，每个单位为2.6×10 N/cm，

13 + 2

A3：辐照剂量为80个单位，每个单位为2.6×10 N/cm；

降解菌株和MC‑LR共存的储备液的制备方法为：9

取50μM的纯MC‑LR储备液200μL加入菌体细胞浓度为10个/mL的800μL细胞悬液中，配制的溶液中细胞悬液与MC‑LR溶液的体积比为4:1；

振荡均匀，在室温下避光培养三天；然后用0.22μm孔径的滤膜过滤，放入‑20℃冰箱保存，制得降解菌株和MC‑LR共存的储备液；

(2)分别配置浓度为1μM和0.1μM的MC‑LR和菌株共存工作液、1μM和0.1μM的纯MC‑LR工作液、降解菌株过滤后工作液；

MC‑LR和菌株共存工作液的配置方法如下：取100μL步骤(1)制得的降解菌株和MC‑LR共存的储备液加入到900μL DMEM完全培养基中，制得浓度为1μM的MC‑LR和菌株共存工作液；

再取100μL制得的1μM的MC‑LR和菌株共存工作液加入到900μL DMEM完全培养基中，制得浓度为0.1μM的MC‑LR和菌株共存工作液；

(3)取处于对数生长期的Hep G2细胞接种在经过宽离子束辐照改性后的96孔板中，每板接种18个孔，一组实验用一个板，总共接种2个板；在染毒一天的实验中，每孔接种8万细胞；在染毒三天的实验中，每孔接种4万细胞；分别培养24h；

宽离子束辐照的能量为10～20keV，剂量为10～20kGy，辐照时间为5～20min；

(4)细胞染毒：24h后，用步骤(2)配制的各浓度的MC‑LR和菌株共存工作液，以及步骤(2)配置的各浓度的纯MC‑LR工作液对Hep G2细胞进行染毒，并设置降解菌株过滤后工作液处理组和对照组；

(5)进行MTT实验：

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将每孔接种8×10 个细胞的96孔板染毒一天后进行MTT实验，将每孔接种4×10个细胞的96孔板染毒三天后进行MTT实验，然后检测其吸光值。

2.根据权利要求1所述的一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，其特征在于，所述降解菌株为蜡状芽孢杆菌M9。

3.根据权利要求1所述的一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，纯MC‑LR工作液配置方法如下：取20μL浓度为50μM的纯MC‑LR储备液加入到980μL DMEM完全培养基中，制得浓度为1μM的纯MC‑LR工作液；

再取100μL制得的1μM的纯MC‑LR工作液加入到900μL DMEM完全培养基中，制得浓度为

0.1μM的纯MC‑LR工作液。

4.根据权利要求1所述的一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，其特征在9

于，所述步骤(2)中，降解菌株过滤后工作液配置方法如下：取浓度为10 个/mL的降解菌株细胞悬液80μL，加入到920μL DMEM完全培养基中制备并用0.22μm孔径的滤膜过滤而成。

5.根据权利要求1所述的一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，细胞染毒的处理方法为：每块96孔板中，三个孔加DMEM完全培养基作为对照，三个孔加1μM的MC‑LR和菌株共存工作液，三个孔加0.1μM的MC‑LR和菌株共存工作液，三个孔加1μM的纯MC‑LR工作液，三个孔加0.1μM的纯MC‑LR工作液，三个孔加降解菌株过滤后工作液；进行细胞染毒实验。

6.根据权利要求1所述的一种评估微囊藻毒素在真实水环境下毒性的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，MTT实验步骤如下：取出染毒后的细胞，吸去孔里的液体，每孔加入200μL的PBS溶液清洗两遍；清洗完，每孔加入200μL浓度为1mg/mL的MTT工作液，放入培养箱孵育4h；每次MTT实验前对MTT工作液超声处理30分钟；

终止孵育，吸弃MTT工作液，每孔加入200μL的盐酸异丙醇溶液，放入二氧化碳培养箱振荡且孵育20分钟，使结晶物充分溶解；然后取出96孔板，用酶标仪在570nm处测定OD值。