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专利号: 2018116302391
申请人: 东北林业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-02-23
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于该方法按以下步骤进行:

(1)钩状木霉NYNJ03孢子悬浮液的制备:取保存于-80℃冰箱中钩状木霉NYNJ03菌株,采用无菌操作技术接种直径为0.4cm菌片于固体PDA培养基中,放置在30℃恒温培养箱中培养6-8天,向培养钩状木霉NYNJ03的平板中缓缓加入5mL灭菌后的PBS,放在震荡培养箱中轻摇20min,将平板表面孢子刮下,脱脂棉过滤,用无菌水反复冲洗两遍,滤液体积达到20mL,即得到孢子悬浮液;

(2)聚乙烯醇-海藻酸钠-培养基(PVA-SA-PDA)核壳结构小球的制备:固体PDA培养基在室温下冷却之后,用刀片将PDA切割成细碎的立方体,配制固定化基质,用16G注射器针头吸取固定化基质并将PDA小块包裹推入交联液中,观察小球形态情况;

(3)Cr(VI)还原剂的制备:在固定化基质中添加分生孢子悬浮液混合,将得到的含分生孢子的混合物,用16G注射器针头将PDA包裹,轻轻注入交联溶液中,然后在4℃下储存使用。

2.根据权利要求1所述的一种固定钩状木霉孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于步骤(1)中钩状木霉NYNJ03由东北林业大学帽儿山林场的土壤中筛选得到,分类命名为:钩状木霉(Trichoderma hamatum),保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏日期为2014年07月03日,保藏编号为CGMCC No:9333。

3.根据权利要求1所述的一种利用包埋法固定钩状木霉NYNJ03分生孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于步骤一中所述于30℃恒温培养箱中培养7天。

4.根据权利要求1所述的一种利用包埋法固定钩状木霉NYNJ03分生孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于步骤一中所述0.4cm菌片为将钩状木霉NYNJ03接种至固体PDA培养基培养3-5天,直至培养基中长满菌丝,用1000μl枪头倒转轻压制成。

5.根据权利要求1所述的一种利用包埋法固定钩状木霉NYNJ03分生孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于步骤二中所述交联液为称取30g硼酸溶于去离子水中,加热溶解,冷却后加入30g氯化钙,用玻璃棒充分搅拌均匀,混合,转移到1000mL容量瓶中定容,作为交联液保存备用。

6.根据权利要求1所述的一种利用包埋法固定钩状木霉NYNJ03分生孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于步骤二中所述固定化基质为称量PVA 2g、SA 1g在75℃-80℃水浴锅中用无菌水加热溶解,在室温环境中放置12小时,再放置水浴锅中1h,这样反复操作三次,在最后一轮水浴中,使混合物的温度降低至40℃,备用。

7.根据权利要求1所述的一种利用包埋法固定钩状木霉NYNJ03分生孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于步骤二中所述用刀片将PDA切割成细碎的立方体,其体积为2mm×

2mm×2mm。

8.根据权利要求1所述的一种利用包埋法固定钩状木霉NYNJ03分生孢子制备Cr(VI)还原剂的方法,其特征在于步骤三中所述的含分生孢子的混合物为固定化基质与分生孢子悬浮液体积比1:10得到。