1.一种来源于Pseudomonas moorei的草铵膦脱氢酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO:6 所示氨基酸序列第107位的亮氨酸取代为精氨酸、第188位的苯丙氨酸取代为脯氨酸、第239位的甘氨酸取代为赖氨酸、第357位的苯丙氨酸取代为甘氨酸获得的。
2.一种权利要求1所述草铵膦脱氢酶突变体的编码基因。
3.一种含权利要求2所述草铵膦脱氢酶突变体的编码基因的工程菌。
4.一种权利要求1所述草铵膦脱氢酶突变体在催化2-羰基-4-(羟基甲基氧膦基)-丁酸合成L-草铵膦中的应用。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于所述的应用以含权利要求1所述的草铵膦脱氢酶突变体的编码基因和葡萄糖脱氢酶基因的重组工程菌经发酵培养获得的湿菌体或湿菌体超声破碎提取的粗酶液为催化剂,以2-羰基-4-(羟基甲基氧膦基)-丁酸为底物,以葡萄糖为辅助底物,加入无机氨基供体,于pH值为7.5的缓冲液中构成转化体系,在35 ℃、600 rpm条件下反应,反应完全,将反应液分离纯化,获得L-草铵膦;所述无机氨基供体为(NH4)
2SO4。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述转化体系中,催化剂的用量以湿菌体重量计为20 100 g/L,所述底物的初始浓度为10 500 mM,葡萄糖添加量为12-600mM,无机氨基~ ~供体添加量为50mM-1.5M。
7.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将含有葡萄糖脱氢酶和权利要求1所述草铵膦脱氢酶突变体的编码基因的重组工程菌接种至含有50 μg/mL氨苄霉素抗性的LB液体培养基,37 ℃,200 rpm下培养12 h,再以体积浓度1%接种量接种至新鲜的含有50 μg/mL氨苄霉素抗性的LB液体培养基中,于37 ℃,150 rpm下培养至菌体OD600达0.6-0.8,加入终浓度为24 μg/mL的IPTG,18℃下诱导培养16 h后,4℃、8000 rpm离心20 min,弃去上清液,收集沉淀,用 pH 7.5、20 mM磷酸盐缓冲液洗涤两次,即获得湿菌体;将湿菌体加入 pH 7.5、100 mM的 PBS中重悬细胞,在冰水混合物上超声破碎 10 min,超声破碎条件:功率为 400 W,破碎 1s,暂停 5s,获得粗酶液。