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专利号: 2018116005516
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2023-12-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体,其特征在于所述突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第98位、305位、451位、111位、139位、403位、469位、372位、325位进行单突变或多突变获得的。

2.如权利要求1所述L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体,其特征在于所述L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体为下列之一:(1)SEQ ID NO.1所示氨基酸第469位的丝氨酸突变为脯氨酸;(2)SEQ ID NO.1所示氨基酸第111位的脯氨酸突变为丝氨酸;(3)SEQ ID NO.1所示氨基酸第

139位的谷氨酰胺突变为脯氨酸;(4)SEQ ID NO.1所示氨基酸第98位的精氨酸突变为组氨酸、第305位赖氨酸突变为谷氨酸;(5)SEQ ID NO.1所示氨基酸第372位的颉氨酸突变为谷氨酸、403位半胱氨酸突变为亮氨酸;(5)SEQ ID NO.1所示氨基酸第98位的精氨酸突变为组氨酸、第305位赖氨酸突变为谷氨酸、第451位的异亮氨酸突变为颉氨酸;(6)SEQ ID NO.1所示氨基酸第325位的色氨酸突变为精氨酸。

3.一种权利要求1所述L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体编码基因。

4.一种由权利要求3所述编码基因构建的工程菌。

5.一种权利要求1所述L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体在转化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸中的应用。

6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述的应用为:以含L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体基因的工程菌经诱导培养获得的湿菌体为催化剂,以L-天冬氨酸为底物,以pH7.0磷酸盐缓冲液为反应介质构成转化体系,在37℃、200rpm条件下进行转化反应,反应完全后,获得β-丙氨酸转化液,分离提取,获得β-丙氨酸。

7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述转化体系中,催化剂加入量以湿菌体重量计为1-10g/L,所述底物终浓度为50-100g/L。

8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将含L-天冬氨酸-α-脱羧酶突变体基因的工程菌接种于含100μg/mL卡那霉素的LB培养基中,37℃,200r/min振荡培养12h;获得种子液;将种子液以体积浓度2%接种量转接于含100μg/mL卡那霉素的LB培养基中,在37℃,200r/min下培养至OD600在0.6-0.8,加入终浓度0.2mM异丙基硫代半乳糖苷,然后30℃,200r/min诱导表达培养12h,在4℃下10000rpm离心10min,收集菌体细胞。