1.一种流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP，其特征在于：所述流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP的氨基酸序列是：

MQRVTDNDVANIVRSLFVSGRFDDVKAHQEGDVLVVSVVAKSIISDVKIKGNSIIPTEALKQNLDANGFKVGDVLIREKLNEFAKSVKEHYASVGRYNATVEPIVNTLPNNRAEILIQINEDDKAKLASLTFKGNESVSSSTLQEQMELQPDSWWKLWGNKFEGAQFEKDLQSIRDYYLNNGYAKGGSGGSGGSGGSRPVKIQADNQGVIGTLGGGALGGIAGSAIGGGRGQVIAAVVGAIGGAVAGSKIEEKVSQVNGAELVIKKDDGQEIVVVQKADSSFVAGRRVRIVGGGSNLNVSVL；

用于编码所述流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP的核酸基因全序列是：CATATGCAGCGCGTAACCGACAACGACGTTGCAAACATCGTACGTTCTCTGTTTGTGTCCGGCCGTTTCGATGACGTTAAAGCTCACCAGGAAGGTGATGTTCTGGTTGTTTCTGTTGTTGCAAAATCCATCATCAGTGACGTTAAAATCAAGGGCAACTCTATCATCCCAACTGAAGCTCTGAAGCAGAACCTGGACGCTAACGGTTTTAAAGTAGGTGATGTTCTGATCCGTGAAAAGCTGAACGAATTCGCTAAATCCGTTAAGGAGCATTATGCGAGTGTTGGTCGTTACAACGCTACCGTAGAACCGATTGTTAACACTCTGCCGAACAACCGCGCGGAAATCCTGATCCAGATCAACGAAGATGATAAAGCAAAACTGGCTTCTCTGACCTTCAAAGGTAACGAATCTGTATCCTCATCCACTCTTCAGGAACAGATGGAACTGCAGCCGGACTCTTGGTGGAAGCTGTGGGGCAACAAATTCGAAGGCGCGCAGTTCGAAAAAGACCTGCAATCTATTCGTGATTATTACCTGAACAACGGTTATGCAAAAGGTGGTTCTGGTGGTTCTGGTGGTTCTGGTGGTTCTCGCCCGGTTAAAATCCAGGCTGATAACCAGGGTGTAATCGGCACCCTGGGCGGCGGCGCTCTGGGCGGTATCGCAGGTTCTGCTATCGGCGGCGGTCGCGGCCAGGTTATTGCCGCTGTAGTAGGCGCTATCGGTGGTGCGGTGGCCGGTTCTAAAATCGAAGAAAAGGTTTCCCAGGTAAACGGTGCTGAGCTGGTAATCAAAAAAGACGATGGCCAGGAAATAGTTGTTGTACAGAAAGCCGACTCTTCCTTTGTAGCAGGTCGTCGCGTGCGCATCGTTGGTGGTGGGTCTAACCTGAACGTCTCTGTTCTGTAAGGATCC。

2.一种流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP的制备方法，其特征在于：所述制备方法是：分别获取流感嗜血杆菌表面蛋白D15及表面蛋白PCP胞外结构域中抗原表位最为丰富的肽段并找到该肽段基因编码序列，优化肽段基因编码序列，并将优化后的肽段基因编码序列用柔性连接肽的编码序列进行连接，形成融合基因；

所述流感嗜血杆菌表面蛋白D15及表面蛋白PCP在NCBI蛋白质数据库中的accession number分别为AAX87955及AAX88288；

所述柔性连接肽的序列是ggsggsggsggs；

同时在该融合基因的5’引入酶切位点NdeI、3’端引入终止信号TAA和酶切位点BamHI后化学合成全基因序列，记为d15pcp；

所述d15pcp的基因全序列是：

CATATGCAGCGCGTAACCGACAACGACGTTGCAAACATCGTACGTTCTCTGTTTGTGTCCGGCCGTTTCGATGACGTTAAAGCTCACCAGGAAGGTGATGTTCTGGTTGTTTCTGTTGTTGCAAAATCCATCATCAGTGACGTTAAAATCAAGGGCAACTCTATCATCCCAACTGAAGCTCTGAAGCAGAACCTGGACGCTAACGGTTTTAAAGTAGGTGATGTTCTGATCCGTGAAAAGCTGAACGAATTCGCTAAATCCGTTAAGGAGCATTATGCGAGTGTTGGTCGTTACAACGCTACCGTAGAACCGATTGTTAACACTCTGCCGAACAACCGCGCGGAAATCCTGATCCAGATCAACGAAGATGATAAAGCAAAACTGGCTTCTCTGACCTTCAAAGGTAACGAATCTGTATCCTCATCCACTCTTCAGGAACAGATGGAACTGCAGCCGGACTCTTGGTGGAAGCTGTGGGGCAACAAATTCGAAGGCGCGCAGTTCGAAAAAGACCTGCAATCTATTCGTGATTATTACCTGAACAACGGTTATGCAAAAGGTGGTTCTGGTGGTTCTGGTGGTTCTGGTGGTTCTCGCCCGGTTAAAATCCAGGCTGATAACCAGGGTGTAATCGGCACCCTGGGCGGCGGCGCTCTGGGCGGTATCGCAGGTTCTGCTATCGGCGGCGGTCGCGGCCAGGTTATTGCCGCTGTAGTAGGCGCTATCGGTGGTGCGGTGGCCGGTTCTAAAATCGAAGAAAAGGTTTCCCAGGTAAACGGTGCTGAGCTGGTAATCAAAAAAGACGATGGCCAGGAAATAGTTGTTGTACAGAAAGCCGACTCTTCCTTTGTAGCAGGTCGTCGCGTGCGCATCGTTGGTGGTGGGTCTAACCTGAACGTCTCTGTTCTGTAAGGATCC；

所述d15pcp基因编码的蛋白质序列是：

MQRVTDNDVANIVRSLFVSGRFDDVKAHQEGDVLVVSVVAKSIISDVKIKGNSIIPTEALKQNLDANGFKVGDVLIREKLNEFAKSVKEHYASVGRYNATVEPIVNTLPNNRAEILIQINEDDKAKLASLTFKGNESVSSSTLQEQMELQPDSWWKLWGNKFEGAQFEKDLQSIRDYYLNNGYAKGGSGGSGGSGGSRPVKIQADNQGVIGTLGGGALGGIAGSAIGGGRGQVIAAVVGAIGGAVAGSKIEEKVSQVNGAELVIKKDDGQEIVVVQKADSSFVAGRRVRIVGGGSNLNVSVL；

所述d15pcp基因编码的蛋白质序列为流感嗜血杆菌表面蛋白D15的50‑233aa及表面蛋白PCP的50‑154aa这两段蛋白序列中间以柔性连接肽进行连接；将此基因片段按常规方法

2+

克隆入原核表达载体pET‑28a(+)，用IPTG诱导重组大肠杆菌表达，用Ni 亲和层析法纯化重组D15PCP蛋白。

3.一种用于制备流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体的方法，其特征在于：所述方法是将如权利要求2中所述的重组D15PCP蛋白作为免疫抗原，与弗氏佐剂混合后反复人工免疫健康的新西兰大白兔，抽血进行效价测定，分离高效价重组蛋白抗体并进行纯化，最终获得流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体。

4.一种基于流感嗜血杆菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸，其特征在于：所述基于流感嗜血杆菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸包括包被有权利要求3所述方法制备得到的流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体的乳胶微球标记物以及包被有流感嗜血杆菌表面蛋白Pe+pilA抗体的硝酸纤维素膜；所述流感嗜血杆菌表面蛋白Pe+pilA抗体是将重组Pepil蛋白作为免疫抗原，与弗氏佐剂混合后反复人工免疫健康的新西兰大白兔，抽血进行效价测定，分离高效价重组蛋白抗体并进行纯化，最终获得流感嗜血杆菌表面蛋白Pe+pilA抗体；

所述重组Pepil蛋白的氨基酸序列是：

MLVKNVNYYIDSESIWVDNQEPQIVHFDAVVNLDKGLYVYPEPKRYARSVRQYKILNCANYHLTQVRTDFYDEFWGQGLRAAPKKQKKHEAAAAKEAAAAKLIELMIVIAIIAILATIAIPSYQNYTKKAAVSELLQASAPYKADVELCVYSTNETTNCTGGKNGIAADITTAKGYVKSVTTSNGAITVKGDGTLANMEYILQATGNAATGVTWTTTCKG。

5.一种用于制备如权利要求4所述的基于流感嗜血杆菌表面蛋白的乳胶微球免疫层析试纸的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)制备流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体以及流感嗜血杆菌表面蛋白Pe+pilA抗体；

2)制备流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体的乳胶微球标记物：

2.1)乳胶微球的活化

取浓度为10％的彩色羧基化聚苯乙烯乳胶微球溶液1mL，加入9mL MES缓冲液后混匀，加入NHS以及EDC，至二者的终浓度均为1mg/mL，在室温下缓慢混匀30分钟，孵育结束后

19000g离心20分钟，去上清，沉淀用10mL硼砂缓冲液重悬，振荡，超声处理后即成活化后的乳胶微球；所述MES缓冲液的组分及含量是：0.1mol/L MES，所述MES缓冲液的pH＝8.5；所述彩色羧基化聚苯乙烯乳胶微球的粒径是100nm；所述硼砂缓冲液的组分及含量为0.1mol/L Na2B4O7，所述硼砂缓冲液的pH＝8.5；

2.2)乳胶微球标记物的制备

用硼砂缓冲液将步骤1)所得的流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体稀释成1mg/mL；取

10mL流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体加入10mL活化乳胶微球，缓慢混匀30分钟后

19000g离心10分钟，去上清；沉淀用10mL含有1％酪蛋白的硼砂缓冲液重悬，经超声粉碎后重复离心1次，去上清；沉淀同法重悬，经超声粉碎、振荡后重复离心1次，去上清；沉淀用

10mL含有1％酪蛋白的硼砂缓冲液重悬，即为流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体的乳胶微球标记物；所述硼砂缓冲液的组分及含量为0.1mol/L Na2B4O7，所述硼砂缓冲液的pH＝8.5；

3)结合垫的制备：

向聚酯纤维材质的结合垫上喷涂步骤2)所得到的流感嗜血杆菌表面蛋白D15+PCP抗体的乳胶微球标记物，每平方厘米聚酯纤维膜的喷涂量为10μL乳胶微球标记物；喷涂完后在相对湿度不超过30％的环境中在37℃下烘干，25℃密封干燥保存；

4)抗体固相硝酸纤维素膜的制备：

用硼砂缓冲液将步骤1)所得的流感嗜血杆菌表面蛋白Pe+pilA抗体稀释成1.5mg/mL后用喷膜仪包被到硝酸纤维素膜上的检测线位置作为检测线捕获抗体，包被参数为1μL/cm；

将羊抗兔IgG喷涂到硝酸纤维素膜上的质控线位置作为控制线捕获抗体，浓度为1mg/mL，包被参数为1μL/cm；包被完后将该硝酸纤维素膜放在相对湿度不超过30％的环境中，于37℃下烘干，25℃密封干燥保存；所述硼砂缓冲液的组分及含量为0.1mol/L Na2B4O7，所述硼砂缓冲液的pH＝8.5；

5)样品垫的制备

取玻璃纤维素膜一张，将其在样品垫处理液中浸泡至少3h以上，再置于生物安全柜内

37℃通风干燥后，剪裁成所需的规格，25℃密封干燥保存；至此制得样品垫；

所述样品垫处理液的各组分及含量分别是：0.01mol/L Na2B4O7、2g/L氯化钠、20g/L酪蛋白、10ml/L吐温‑20以及10ml/L消泡剂S‑17；所述样品垫处理液的pH＝8.5；

6)试纸条的组装

分别将吸水滤纸材质的吸水垫、抗体固相硝酸纤维素膜、结合垫、样品垫、依次粘贴在PVC底板上，硝酸纤维素膜上所述质控线靠近吸水垫端，所述检测线靠近样品垫端，再切割成一定宽度的试纸条，密封包装，干燥低温保存；至此制得流感嗜血杆菌乳胶微球免疫层析检测试纸条。