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专利号: 2018113312226
申请人: 沈阳农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
专利领域: 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程
更新日期:2024-01-05
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组表达载体,其特征在于,所述的重组表达载体是将UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因与表达载体连接,构建的重组表达载体;所述的表达载体是枯草芽孢杆菌用载体或大肠杆菌-枯草芽孢杆菌用穿梭载体。

2.根据权利要求1所述的高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组表达载体,其特征在于,所述的表达载体是pHT系列载体、穿梭载体pMA5或穿梭载体pWB980。

3.根据权利要求1所述的高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组表达载体,其特征在于,所述的pHT系列载体是pHT43、pHT304或pHT01载体。

4.根据权利要求1所述的高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组表达载体,其特征在于,所述的表达载体中含有或不含有蛋白纯化标签。

5.根据权利要求1所述的高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组表达载体,其特征在于,所述的蛋白纯化标签是组氨酸(His-tag)标签。

6.一种高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组工程菌,其特征在于,是将权利要求

1-5任一项所述的高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组表达载体转化至宿主菌中构建的重组工程菌;所述的宿主菌是枯草芽孢杆菌。

7.根据权利要求6所述的一种高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组工程菌,其特征在于,所述的转化为电转化。

8.一种高效表达制备UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的方法,其特征在于,方法如下:将权利要求6或7所述的高效表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶的重组工程菌以1-10%的接种量在接种于液体培养基中,于60-200rpm培养至OD600=0.3-1.0时,加入IPTG至终浓度为0.1-

1.5mM,然后在20℃-40℃、80-220rpm条件下诱导培养9-36小时,菌液离心,取上清液。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:所述的液体培养基是含有抗生素的LB液体培养基。