1.一种黄鳝抗菌肽的制备方法,包括以下步骤:
1)将黄鳝抗菌肽基因与载体连接构建重组载体;
2)将步骤1)中获得的重组载体转入到毕赤酵母中获得重组菌株;
3)将重组菌株以0.9~1.1%接种体积接种到BMGY培养基中诱导培养47~49h获得培养液;步骤3)中接种的重组菌的OD为0.8~1.2;
4)收集培养液中的菌体细胞进行破碎,获得细胞破碎液,镍柱收集和纯化所述细胞破碎液获得黄鳝抗菌肽;所述黄鳝抗菌肽基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述菌体细胞采用蜗牛酶孵育后与TritonX‑100、PMSF混合在超声作用下实现破碎;
所述载体为pPIC9K载体,所述黄鳝抗菌肽基因连接在载体中EcoRI和NotI酶切位点之间;
步骤4)中所述蜗牛酶与菌体细胞的质量比为(6~8):200;所述蜗牛酶孵育的温度为35~40℃,所述蜗牛酶孵育的时间为50~70min。
2.根据权利要求1所述的黄鳝抗菌肽的制备方法,其特征在于,步骤3)中诱导培养过程中添加甲醇。
3.根据权利要求1所述的黄鳝抗菌肽的制备方法,其特征在于,步骤1)中所述连接的体系包括以下组分:10×T4 DNA Ligase Buffer 1μL,黄鳝抗菌肽基因3μL,载体1μL,T4DNA Ligase 1μL和ddH2O 4μL;步骤1)中所述连接的温度为3~5℃,所述连接的时间为10~14h。
4.根据权利要求1~3任意一项所述的制备方法制备获得的黄鳝抗菌肽在制备鱼类饲料中的应用。